[发明专利]一种火木层孔菌株及其应用

权利要求书

1.一种火木层孔菌株(Phellinusigniarius)，其保藏号为：CGMCCNO.11737。

2.如权利要求1所述的火木层孔菌株在生产桑黄多糖中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)将所述火木层孔菌株的菌丝体加入水中，菌丝体和水的质量比为1:10-50， 然后将温度升到50-90℃，提取1-4h得到提取液；

步骤(2)对提取液进行超滤分离，超滤分离采用用PS-4020中空纤维膜，流速为3～ 5L/h，压力为0.10～0.15MPa，得到透过液；

步骤(3)取桑黄发酵液加入1-3倍体积的乙醇，沉淀9～15h；离心去掉上清液，沉淀 物溶解于蒸馏水中，放入透析袋中透析2d，每10～12h换水一次；将透析物于50℃干燥20～ 24h制得胞外多糖；

步骤(4)将所述胞外多糖与所述透过液混合后经过Sevag法脱蛋白以及取Sephadex 进行凝胶层析进一步纯化制得桑黄多糖。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(4)中，所述Sevag法脱蛋白 的具体过程为：于所述胞外多糖与所述透过液的混合液中加入Sevag溶液，混合液和Sevag 溶液的体积比为l：l，振荡时间为15min，用4～5倍体积95％乙醇沉淀24h，液体离心10min， 弃去上清液；其中所述Sevag溶液中氯仿和正丁醇的体积比为10：3，。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述Sephadex凝胶层析的具体过程为： 取Sephadex进行凝胶层析，加100ml蒸馏水室温溶胀72～78h；待溶胀平衡后，倾去上层 清液，包括细颗粒，然后再放些蒸馏水搅乱，静置使凝胶下沉，再倾去上层清液，至无细 颗粒为止，溶胀平衡和漂洗净的凝胶除去气泡，取2.6x100cm层析柱装柱，柱中洗脱加入 少量洗脱液，使高出床表面3-5cm，接上恒压洗脱瓶，调节操作压在30cmH20以内；收 集洗脱流出液，烘干后得桑黄多糖。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，培养所述火木层孔菌 株以制备得到菌丝体，培养过程中，种子培养基的各组分按重量百分比计：葡萄糖1-2％， 酵母浸粉1-2％，蛋白胨1-2％，麦芽糖0.5-1％，硫酸镁0.05-0.1％，磷酸二氢钾0.05％， PH值为5.0-5.5；发酵培养基配方：麦麸浓度35-45g/L，葡糖糖30-40g/L，蛋白胨1.0-2.0g/L， 硫酸镁0.5-1.5g/L，磷酸二氢钾0.1-0.3g/L，PH值为4.5-5.5。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，培养所述火木层孔菌 株的具体过程为：

步骤①对所述火木层孔菌株进行摇瓶培养，摇瓶培养基为所述种子培养基，在 24-26℃，120rpm振荡培养72-90h，得到摇瓶菌种；

步骤②对摇瓶菌种进行摇瓶扩大培养，摇瓶扩大培养基为所述种子培养基，在 24-26℃，120rpm振荡培养24-36h，得到扩大摇瓶菌种；

步骤③对扩大摇瓶菌种进行一级种子培养，一级种子培养基为所述种子培养基，培养 温度为24-26℃，通气量与一级种子培养基的体积比为1:0.3-0.8，通气压力为0.6-1.0kPa， 转速为100r/min，培养36-45h，得到一级种子；

步骤④对一级种子进行二级种子培养，二级种子培养基为所述种子培养基，培养温度 为24-26℃，通气量与二级种子培养基的体积比为1:0.3-0.8，通气压力为0.6-1.0kPa，转 速为100r/min，培养40-60h，得到二级种子；

步骤⑤对二级种子进行发酵培养，发酵所采用的培养基为所述发酵培养基，培养温度 为24-26℃，通气量与发酵所采用的培养基的体积比为1:0.3-0.8，通气压力为0.3～0.8kPa， 初始转速为100r/min，通过调整转速控制溶氧值在60％，培养90-120h。