[发明专利]一种猪源口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC的单链抗体及其制备方法和用途在审
| 申请号： | 201610025332.4 | 申请日： | 2016-01-14 |
| 公开（公告）号： | CN105693853A | 公开（公告）日： | 2016-06-22 |
| 发明（设计）人： | 张澍;吕宏亮 | 申请（专利权）人： | 北京健翔和牧生物科技有限公司;吕宏亮;张澍 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C12N15/13;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 孙皓晨;马鑫 |
| 地址： | 100176 北京市朝阳区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 口蹄疫病毒 结构 蛋白 abc 抗体 及其 制备 方法 用途 | ||
1.猪源口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC的单链抗体，命名为PRAb-scFv-3B2，其 特征在于所述单链抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。
2.编码权利要求1所述的单链抗体的核苷酸序列。
3.权利要求1所述的单链抗体在制备检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC或3C 蛋白试剂中的用途。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述的试剂用于区分口蹄疫病毒自然 感染动物以及口蹄疫疫苗免疫动物。
5.一种用于区分口蹄疫病毒自然感染动物以及口蹄疫疫苗免疫动物的口蹄疫 病毒3ABC抗体竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括包被口蹄疫病毒非结构 蛋白3ABC的酶标板以及权利要求1所述的单链抗体PRAb-scFv-3B2。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性对照、阳 性对照、封闭液、显色液、洗涤液。
7.如权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于用于区分口蹄疫病毒自然感染 动物以及口蹄疫疫苗免疫动物时，按照以下方法进行：
(1)取出包被口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC的酶标板，以洗涤液洗板；
(2)向酶标板中加入封闭液稀释的待测动物血清，37℃孵育30分钟，并不断 摇动，加入权利要求1所述的单链抗体PRAb-scFv-3B2，37℃孵化60分钟并不断摇 动，以洗涤液洗板；同时加入阴性血清和阳性血清作对照；
(3)然后加入辣根过氧化物酶标记的兔抗3ABC单链抗体的IgG抗体；
(4)向加酶标记抗体后的酶标板中加入TMB溶液，振荡混合后37℃显色， 2M硫酸溶液终止反应；
(5)检测在OD450nm处的吸光值A450nm。
8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为未感染口 蹄疫病毒也未接种口蹄疫疫苗的阴性血清；阳性对照为口蹄疫病毒阳性血清；所述 封闭液为含有1％牛血清白蛋白的PBST缓冲液；所述洗涤液为PBST缓冲液。
9.权利要求5-8任一项所述的试剂盒在在制备区分口蹄疫病毒自然感染动物以 及口蹄疫疫苗免疫动物试剂中的用途。
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