[发明专利]NtR2根启动子驱动AhRESS在本生烟草发状根产白藜芦醇方法在审
| 申请号： | 201610025959.X | 申请日： | 2016-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN105505983A | 公开（公告）日： | 2016-04-20 |
| 发明（设计）人： | 邓烨;庄伟建;马世伟;陈华;蔡铁城;张冲 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/06 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | ntr2 启动子 驱动 ahress 本生 烟草 发状根产白 藜芦 方法 | ||
1.启动子NtR2驱动AhRESS在本生烟草发状根产白藜芦醇方法，其特征在于：包括以下 步骤：
（1）克隆烟草根特异启动子NtR2和花生AhRESS基因；
（2）烟草根特异启动子NtR2驱动花生AhRESS基因表达载体pBI121-NtR2-AhRESS的构 建；
（3）pBI121-NtR2-AhRESS经发根农杆菌介导转化本生烟草；
（4）转pBI121-NtR2-AhRESS本生烟草发状根液体悬浮培养；
（5）转pBI121-NtR2-AhRESS本生烟草发状根白藜芦醇含量的检测。
2.根据权利要求1所述的启动子NtR2驱动AhRESS在本生烟草发状根产白藜芦醇方法， 其特征在于：所述步骤（1）中烟草根特异启动子NtR2的序列为SEQIDNo：1，花生AhRESS基 因的序列为SEQIDNo：2。
3.根据权利要求1所述的启动子NtR2驱动AhRESS在本生烟草发状根产白藜芦醇方法， 其特征在于：步骤（2）具体方法为：
1）将烟草根特异启动子NtR2连接至pMD18-T载体中，得到pMD18-NtR2载体；
2）pBI121-NtR2-GUSA载体构建：将pBI121载体进行酶切，切除该载体上的GUSA基因，从 pCAMBIA-1301载体中克隆GUSA基因连接至pBI121载体上，构建pBI121-GUSA；将pBI121- GUSA载体进行酶切反应，切除35S启动子，将pMD18-NtR2载体进行酶切反应，将NtR2启动子 连接至pBI121-GUSA载体中，得到pBI121-NtR2-GUSA载体；
3）pBI121-NtR2-AhRESS载体的构建：花生AhRESS基因连接到pBI121-NtR2-GUSA载体 中，得到pBI121-NtR2-AhRESS载体。
4.根据权利要求1所述的启动子NtR2驱动AhRESS在本生烟草发状根产白藜芦醇方法， 其特征在于：所述步骤（3）中发根农杆菌其介导的本生烟草遗传转化采用叶盘法。
5.根据权利要求1所述的启动子NtR2驱动AhRESS在本生烟草发状根产白藜芦醇方法， 其特征在于：所述步骤（4）中转pBI121-NtR2-AhRESS本生烟草发状根液体悬浮培养所用培 养基为MS培养基+500mg/LCef，第一次继代培养基为MS培养基+300mg/LCef，第二次继 代培养基为MS培养基+100mg/LCef，第三次继代培养基为MS培养基，三次继代后头孢霉素 浓度降至0。
6.根据权利要求1所述的启动子NtR2驱动AhRESS在本生烟草发状根产白藜芦醇方法， 其特征在于：所述步骤（5）中转pBI121-NtR2-AhRESS本生烟草发状根白藜芦醇含量的检测 方法为HPLC，色谱条件为：色谱柱ODS，流动相乙腈：水=25:75，流速1.0mL/min，检测波长 306nm，柱温25℃，进样量10μL。
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