[发明专利]定向诱导绒山羊毛囊干细胞向毛囊细胞分化的方法

说明书

本发明公开了一种定向诱导绒山羊毛囊干细胞向毛囊细胞分化的方法，属于绒山羊毛囊干细胞的诱导分化领域。本发明通过向绒山羊毛囊干细胞中加入不同浓度的褪黑素进行诱导，发现浓度为500pg/ml的褪黑素可以有效的促进毛囊干细胞向毛囊细胞分化。在整个诱导期，500pg/ml的褪黑素仅会诱导分化得到毛囊细胞，而不会诱导产生表皮细胞，而且诱导14d的分化效率最佳。本发明建立的外源褪黑素定向诱导绒山羊毛囊干细胞向毛囊细胞高效分化的方法，不仅操作简便，可重复性好，而且对毛囊干细胞的体外培养，尤其是对于毛囊干细胞体外高效定向诱导的命运决定等相关研究及应用具有重要的实际意义。

技术领域

本发明涉及绒山羊毛囊干细胞，尤其涉及定向诱导绒山羊毛囊干细胞向毛囊细胞分化的方法，属于绒山羊毛囊干细胞的诱导分化领域。

背景技术

毛囊来源干细胞(hair follicle stem cells，FSC)是指存在于毛囊里的原始细胞，它可以在体内外分化为不同类型的细胞。目前多数研究将定位于毛囊隆突部和外根鞘的角质形成干细胞称为毛囊干细胞(Yasuyuki et x1.,Implanted hair follicle stemcells form Schwann cells that support repair of severed peripheral nerves[J].PNAS,2005,102(49):17734-17738.)。毛囊干细胞在光镜下观察呈立方形，体积偏小，折光性能强，细胞大小较为均一，整体呈铺路石状生长，细胞核质比较大，有3-5个核仁，具有幼稚细胞的形态特征。毛囊干细胞在体内大多处于静息的状态，一旦微环境发生改变，就会表现出惊人的增殖能力。许多研究人员己经采用不同的方法分离得到了毛囊干细胞，其方法主要有：流式细胞仪分选法、应用酶消化法、组织块法、差速贴壁法、显微分离法和免疫磁珠法等。

褪黑素(melatonin,MLT)主要由哺乳动物及人类的松果体产生，是一种吲哚类化合物/胺类激素，其分泌量昼夜不同，白天分泌量减少，夜晚分泌量增加。褪黑素学名为N-乙酸-5-甲氧基色胺，分子式C₁₃H₁₆N₂O₂，相对分子质量为232.27，熔点116-118℃，是一种部分亲水性和高亲脂性的化合物，属中性偏弱酸性，不溶于水，溶于乙醇、乙醚、丙酮等有机溶剂，受热易分解，产品性状为白色或淡黄色结晶状粉末。研究表明，不论在山羊生绒期还是非生绒期，皮下埋置褪黑激素都可以促进绒毛的生长。

目前，关于褪黑素对毛囊来源干细胞分化的影响尚未见报道。因此，建立一种外源褪黑素定向诱导绒山羊毛囊干细胞向毛囊细胞高效分化的方法，对于毛囊干细胞体外高效定向诱导的命运决定等相关研究将具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种定向诱导绒山羊毛囊干细胞向毛囊细胞分化的方法，该方法利用褪黑素定向诱导绒山羊毛囊干细胞向毛囊细胞高效分化，操作简便，可重复性好，为毛囊干细胞体外培养及研究应用的开展奠定了基础。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明首先公开了一种定向诱导绒山羊毛囊干细胞向毛囊细胞分化的方法，包括：向绒山羊毛囊干细胞中加入褪黑素进行诱导，然后对诱导分化的细胞进行鉴定，即得；其中，所述褪黑素的使用浓度为100-700pg/ml；优选的，所述褪黑素的使用浓度为500-700pg/ml，最优选为500pg/ml。本发明所述诱导的时间为1-21天，优选为7-21天，最优选为14天。本发明所述绒山羊毛囊干细胞为内蒙古白绒山羊毛囊干细胞。