[发明专利]一种基于20个三等位基因SNP遗传标记的法医学复合检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明属法医学技术领域，具体涉及一种基于20个三等位基因SNP遗传标记的法医学复合检测试剂盒及检测方法。本发明试剂盒由分离包装的复合扩增引物混合物、多重单碱基延伸反应引物混合物、等位基因分型标准物混合物、复合扩增反应混合液、单碱基延伸反应混合液构成。本发明还公开了利用该试剂盒进行检测的方法，包括提取样品核酸、配置反应体系进行扩增、电泳分析步骤。本发明通过单管内的复合扩增反应和多重单碱基延伸反应，利用通用的毛细管电泳平台，可一次性快速、准确地获得生物检材的20个三等位基因SNP遗传标记的分型，确定检材的个体来源，为法医个人识别提供一种新的技术手段。该试剂盒在法医学领域具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于法医遗传学领域，具体涉及一种用于法医个体识别的基于20个三等位基因SNP遗传标记的法医学复合检测试剂盒。

背景技术

单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)作为第三代遗传标记，具有含量丰富、遗传稳定、突变率低的特点，在法医学中有特殊的应用价值。目前有若干种二等位基因SNP的法医试剂盒已经市场化并应用于法医个人识别或亲子鉴定，大量的实验和实际应用结果显示二等位基因SNP的法医试剂盒可以解决很多法医学实际问题。

但是，二等位基因的SNP有其局限性，比如信息量与具有较多等位基因的STR遗传标记差距较大，至少需要50－60个SNP位点才能达到13－15个常用STR的累计个人识别率和非父排除率。而大量二等位基因SNP的复合扩增，不仅增加了检测成本，且大大增加了复合检测和数据分析的难度。二等位基因SNP的另一个局限性在于无法用于混合样本的分析。混合样本，尤其是混合血痕，是暴力犯罪和意外事故中常见的生物性检材。二等位基因SNP无法提示混合样本中多个来源个体的存在，因而对混合样本的分析无能为力。

三等位基因单核苷酸多态性(Tri－allelic Single Nucleotide Polymorphism，Tri－allelic SNP)是指在一个群体中基因的特定核苷酸位置上出现三种碱基，其中最少的一种在群体中的频率大于1％。理论上，三等位基因SNP具有低突变率、只需扩增很短DNA片段就可以包含SNP位点等特点，而且由于等位基因数量增加，因此可以用比二等位基因SNP少的位点数就可获得和现有STR系统大致相同的个人识别率和非父排除率。然而，目前有关三等位基因SNP在法医物证领域的研究还属于起步阶段。2004年，Phillips等首次提出了三等位基因SNP在法医物证领域应用的可能性，并在欧洲和非洲人群中发现了9个三等位基因SNP。而Westen等在2009年通过在荷兰人和欧美混血人群中共发现了11个具有三等位基因的SNP，并证实它们可以有效地分型降解样本。Antoinette等同时采用DNA修饰酶法﹑miniSTR系统和三等位基因SNP系统对降解样本进行分型，结果显示三等位基因SNP非常适合鉴定降解样本。

目前为止，可以应用于法医学个人识别的三等位基因SNP数量有限，尚无法构建可以与现有STR系统媲美的高识别能力的体系。如何从庞大的SNP数据库中筛选到一组三等位基因SNP，构建一种基于现有法医遗传实验室通用的毛细管电泳平台进行分析检测的试剂盒，可对痕量、降解检材的DNA进行个人识别、能对混合检材进行分析，以达到确定检材个体来源的目的，已经成为法医遗传界有待解决的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是实现利用三等位基因SNP遗传标记对未知来源的人类生物学检材进行法医学个人识别，从而能确定所述样本的个体来源。

本发明解决该技术问题的方案是提供一种基于20个三等位基因SNP遗传标记的法医学复合检测试剂盒。该基于20个三等位基因SNP遗传标记的法医学复合检测试剂盒由分离包装的复合扩增引物混合物、多重单碱基延伸反应引物混合物、等位基因分型标准物混合物、复合扩增反应混合液和单碱基延伸反应混合液、扩增产物纯化试剂组成。