[发明专利]一种侯钩藤的分子鉴定方法

权利要求书

1.一种侯钩藤的分子鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.以待测样品的总DNA为模板，利用引物ITS5和ITS4扩增得到待测植物的rDNA ITS序列；

S2.将上述rDNA ITS序列与侯钩藤的ITS序列进行比对分析，找出匹配后的12位、86位、105位、120位、450位、547位或569位的碱基中的至少2个碱基进行比对，根据比对结果鉴定待测样品是否为侯钩藤；

其中，步骤S2中所述结果鉴定的标准是，当待测样品的ITS区序列出现以下条件：

a.120位为A并且547位为T；

b.12位为A并且569位没有T的插入；

c.105位为C并且86位为T；

d.105位为C并且450位为C；

当满足a、b、c、d至少一个条件时，判定待测样品是侯钩藤，当待测样品的ITS区序列不符合a、b、c、d中任何一个条件时，判定待测样品不是侯钩藤；

其中，步骤S1中所述引物ITS5的序列如SEQ ID NO.2所示，引物ITS4的序列如SEQ IDNO.3所示，所述侯钩藤的ITS序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述侯钩藤的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S1所述待测样品为茜草科钩藤属植物。

3.根据权利要求1所述侯钩藤的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S1所述待测样品为新鲜采集的茜草科钩藤属植物的叶片。

4.根据权利要求1所述侯钩藤的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S1所述待测样品为新鲜采集的并经硅胶快速干燥后密封保存的茜草科钩藤属植物的叶片。

5.根据权利要求1所述侯钩藤的分子鉴定方法，其特征在于，步骤S1的具体方法是：以待测样品的总DNA为模板，利用引物ITS5和ITS4进行PCR扩增，扩增产物纯化后连接到载体pMD18-T，连接产物转化到E.coli JM109感受态细胞，进行氨苄青霉素选择，对阳性菌落进行测序，测序引物同为ITS5和ITS4，得到rDNA ITS 序列。

6.权利要求1-5任一项所述侯钩藤的分子鉴定方法在鉴定钩藤属植物侯钩藤方面的应用。