[发明专利]一种唾液酸酶Neu1在制备药物方面的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种唾液酸酶Neu1在制备药物方面的用途，属于药物制备技术领域。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，也是全身十大常见肿瘤之一。全球每年大约有43 万人被诊断为膀胱癌，其中约17万人死于膀胱癌，其致死率约为38％。膀胱癌在我国泌尿生 殖系肿瘤发病率中高居榜首，膀胱癌的发病率随年龄增长而增加，高发年龄段为50-70岁。 男性膀胱癌发病率高于女性。膀胱癌患者经尿道电切术后，其复发率约为70％，一般术后膀 胱内灌注卡介苗或化疗药物可降低其复发率。常用的灌注化疗药物有丝裂霉素、阿霉素、噻 替派、羟基喜树碱等。

目前在哺乳动物体内共发现了4种唾液酸酶(Neuraminidases，NA)，其中Neu1最为保 守，主要定位于溶酶体，其功能是特异识别低聚糖和糖蛋白中的糖苷键，并对其进行剪切。 唾液酸酶抑制剂可抑制人皮肤成纤维细胞、主动脉平滑肌细胞金额耳软骨细胞中弹性纤维的 组装，并引起弹性纤维的合成受损。在过去的40年中，细胞表面糖蛋白唾液酸的修饰情况常 作为区分不同肿瘤的标志，因此唾液酸也被认为是潜在的癌症治疗靶点，Neu1作为可水解唾 液酸的酶也受到高度关注。有研究者对多株小鼠结肠腺癌细胞分析，发现恶性程度较高的细 胞株中Neu1表达明显低于良性细胞株，然而该研究仅限于表达量的分析，并没有进一步数 据表面其与结肠腺癌之间的关系，由于生物机体的性能受到大量基因的相互作用与影响，所 以Neu1与结肠腺癌的关系尚未可知。

由于膀胱癌的发病率居高不下，并且复发率很高，开发有效治疗膀胱癌的药物是目前亟 需解决的问题。

发明内容

为了克服上述问题，本发明提供了一种唾液酸酶Neu1的新用途，是首次报道Neu1在有 效治疗膀胱癌中的应用。本发明的有效的蛋白Neu1，通过质粒构建，转染至膀胱癌细胞中， 引起相关通路的激活或抑制，并用实验数据表明该蛋白对膀胱癌的治疗具有一定的治疗效果。

本发明的唾液酸酶Neu1，其氨基酸序列如(a)或(b)所示：

(a)氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；

(b)在(a)的基础上发生氨基酸插入、缺失或者替换得到的氨基酸序列，且编码有活 性的唾液酸酶。

所述唾液酸酶Neu1的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。

本发明提供了所述唾液酸酶Neu1在制备药物方面的应用；是用来制备抑制膀胱癌细胞 迁移或者增殖的药物。

在本发明的一种实施方式中，所述药物是抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述应用，是先将编码氨基酸序列如SEQIDNO.1的唾液 酸酶Neu1基因，采用适合的表达载体和/宿主进行表达得到唾液酸酶Neu1，然后再用于制备 药物。

在本发明的一种实施方式中，所述表达载体为真核表达载体。

在本发明的一种实施方式中，所述药物，可以在膀胱癌的治疗中可通过膀胱灌注的方法 使用，以达到抑制膀胱癌的效果。

本发明还提供表达唾液酸酶的转基因细胞系或者基因工程菌在制备抑制膀胱癌细胞迁移 和/或增殖的药物方面的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述唾液酸酶Neu1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。

本发明的有益效果：发现了一种唾液酸酶Neu1的新用途，是首次报道Neu1在有效治疗 膀胱癌中的应用。本发明的唾液酸酶对α2,3及α2,6连接形式的底物均能进行水解，对细胞表 明的FN进行转化，同时首次发现该酶能够通过将癌细胞表面因子纤连蛋白FN的唾液酸去掉 导致FN的降解，而抑制膀胱癌细胞的增殖能力。本发明的有效的蛋白Neu1转染至膀胱癌细 胞中，可引起相关通路的激活或抑制，实验数据表明该蛋白对膀胱癌的治疗具有一定的治疗 效果。

附图说明

图1为YTS-1/Neu1和YTS-1中Neu1的表达情况；

图2为YTS-1/Neu1和YTS-1细胞中唾液酸水平的差异；

图3为YTS-1/Neu1和YTS-1细胞中唾液酸酶活性的差异；

图4为膀胱癌细胞YTS-1中过表达Neu1蛋白后FN蛋白表达的变化；

图5为膀胱癌细胞YTS-1中过表达Neu1蛋白后细胞增殖能力的变化；