[发明专利]一种利用菊粉进行双歧杆菌培养的方法

权利要求书

1.一种利用菊粉进行双歧杆菌培养的方法，其具体操作步骤为：

首先进行原种液体培养，将双歧杆菌菌种放入厌氧培养器皿中进行培养，所述培养基 内需要放置经杀菌处理的培养基，所述培养基由植物蛋白胨、胰胨、酵母浸膏、葡萄糖、盐溶 液、蒸馏水构成，培养时培养器皿放置在通风处，确保培养器皿处理低温状态；

（2）然后进行多级菌种培养，所述多级培养分为一级静态培养、动态培养、二级静态培 养，所述一级静态培养时将土豆、菊粉进行蒸煮，蒸煮后将其搅拌并混合在一起，然后将其 放入作为培养基放入培养液中备用，再将上述步骤中的菌种接种到培养液中；动态培养时 取一级静态培养液，但培养皿换为无色透明试剂瓶，将试剂瓶进行灭菌，灭菌后放入培养 液，然后接种一级菌种10%后，每隔5小时晃动1分钟，培养24-96小时，当细胞达到1.0亿CFU/ g时终止培养，室温下保存备用；动态培养后进行二级静态培养，取植物蛋白胨、肝提取液、 玉米浆、酵母膏、肉牛浸膏、西红柿培养基放入蒸馏水中进行溶解，溶解后将菊粉进行蒸煮， 蒸煮后将菊粉和上述溶解液进行混合，以此作为培养基，然后进行二级菌种接种，接种20% 后静置，当细胞达到1.8亿CFU/g时终止培养，室温下保存备用；

（3）最后进行固体培养，利用玉米粉、大米粉、菊粉、全脂乳粉、肝提取液、玉米浆、酵母 膏、肉牛浸膏进行固体培养基制作，然后对培养基进行冷却灭菌，然后将三级液态菌种浸入 到固体培养内，然后将浸入菌种的固体培养基放入培养房内进行静置发酵培养，当细胞达 到6亿CFU/g时终止培养。

2.按照权利要求1所述的一种利用菊粉进行双歧杆菌培养的方法，其特征在于所述西 红柿浸出液的制备方法为：将新鲜西红柿洗净称重后切碎，加等量蒸馏水在100℃水浴中 加热，时时搅拌，约90min，然后用绒布过滤，校正pH7.0，分装三角瓶，115℃高压灭菌15～ 20min。

3.按照权利要求1所述的一种利用菊粉进行双歧杆菌培养的方法，其特征在于所述肝 提取液的制备方法为：称取新鲜猪肝1000g，切成小块或绞碎，加蒸馏水至2000mL，混匀，置 冰箱中过夜，第二天煮沸15～20min，绒布过滤，并挤压收集全部滤液,加水补足原量，分装 三角瓶，115℃高压灭菌15～20min。

4.按照权利要求1所述的一种利用菊粉进行双歧杆菌培养的方法，其特征在于所述菊 粉的制备方法为：首先将菊芋清洗粉碎，加入菊芋质量的1-2倍质量体积的水混匀后用泵打 入浸提罐；然后添加纤维素酶和果胶酶进行浸提：往浸提罐里加入纤维素酶和果胶酶，得菊 粉浸提液；酶加量为酶活与菊芋质量比，其中纤维素酶的加量为0.01~0.5U/g，果胶酶的加 量为10~100U/g，浸提温度50℃，浸提时间为20min~60min；再进行菊粉浸提液除杂脱 色：菊粉浸提液中加入石灰乳调节pH至11-13，80℃静置30min，再用磷酸调节至pH6，过滤， 滤液中加入其质量0.5%~2%的活性炭，80℃搅拌20~30min，得除杂脱色的浸提液；最后 进行浓缩喷雾干燥：除杂脱色的浸提液通过减压蒸馏或膜浓缩方式浓缩，得菊粉浓度20%~ 30%的菊粉浓缩液；对菊粉浓缩液进行喷雾干燥，得到菊粉粉末成品。