[发明专利]一种中成药“二丁颗粒”HPLC指纹图谱的构建方法

说明书

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及中成药HPLC指纹图谱的构建方法。

背景技术

中国药典2015年版一部公开了由紫花地丁、半边莲、蒲公英、板蓝根四味组成的清热解毒中成药(商品名：二丁颗粒)的质量控制方法，包括颗粒的性状；紫花地丁中秦皮乙素成分及蒲公英中咖啡酸成分的薄层鉴别；秦皮乙素的含量测定。其质量标准只控制一味药的一种成分的含量测定及单一成分的定性鉴别，难以从整体上反应产品的质量或从整体上控制产品的质量。

中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种中成药“二丁颗粒”HPLC指纹图谱的构建方法，用于二丁颗粒生产中的质量控制，克服现有技术的上述不足，

本发明的二丁颗粒指纹图谱的构建方法包括如下步骤：

1、供试品溶液的制备：取二丁颗粒研细粉末2～5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％～100％的甲醇溶液10～50ml，称定重量，超声提取20～40分钟，再称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2、对照品溶液的制备：取秦皮乙素对照品适量，用50％～100％的甲醇溶液溶解，制成每1ml含秦皮乙素20μg的溶液，即得。

色谱条件：Agilent ZORBAX SB‐C18(5μm，4.6×250mm)柱为色谱柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.4％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1ml/min，柱温30～40℃，检测波长为330～360nm。

3、测定：精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到二丁颗粒的指纹图谱。

本发明二丁颗粒的指纹图谱的最佳建立方法如下：

1、供试品溶液的制备：取二丁颗粒研细粉末约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25ml，称定重量，超声提取30分钟，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2、对照品溶液的制备：取秦皮乙素对照品适量，用70％的甲醇溶液溶解，制成每1ml含秦皮乙素20μg的溶液，即得。

色谱条件：Agilent ZORBAX SB‐C18(5μm，4.6×250mm)柱为色谱柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.4％磷酸水溶液，梯度洗脱，流速1ml/min，柱温35℃，检测波长为353nm。

梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0～5min，A相5％～22％，B相95％～78％；5～15min，A相22％～25％，B相78％～75％；15～25min，A相25％～28％，B相75％～72％；25～40min，A相28％～30％，B相72％～70％；40～50min，A相30％～40％，B相70％～60％；50～60min，A相40％～45％，B相60％～55％；60～75min，A相45％～60％，B相55％～40％。即梯度洗脱程序梯度洗脱程序以如下体积比浓度配置进行：

表1 梯度洗脱程序表

3、测定：精密吸取供试品溶液5～20μl注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，得到二丁颗粒的指纹图谱。

用前述二丁颗粒指纹图谱的构建方法建立10批次二丁颗粒HPLC指纹图谱，采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004年A版)”生成有8个共有峰构成的二丁颗粒HPLC标准指纹图谱。其中第2号峰为秦皮乙素峰、3号峰为咖啡酸峰。如图3所示。

在标准指纹图谱中，以秦皮乙素峰为参照峰S峰，计算各共有峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在第一规定值的±8％之内，所述第一规定值为：0.75‐峰1、1.00‐峰S、1.04‐峰3、1.37‐峰4、1.47‐峰5、2.00‐峰6、2.20‐峰7、2.66‐峰8；所述共有峰的峰面积在第二规定值的±20％之内，所述第二规定值为：0.23‐峰1、1.00‐峰S、0.05‐峰3、0.04‐峰4、0.03‐峰5、0.10‐峰6、0.18‐峰7、0.17‐峰8。

取二丁颗粒样品，按上述同法操作，得到二丁颗粒样品指纹图谱，采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004年A版)”软件对二丁颗粒标准指纹图谱和样品指纹图谱进行分析，相似度大于0.90。

二丁颗粒相关性研究：共有峰的归属