[发明专利]AaPDR3基因启动子及其应用有效
| 申请号： | 201610031095.2 | 申请日： | 2016-01-18 |
| 公开（公告）号： | CN105567685B | 公开（公告）日： | 2018-07-13 |
| 发明（设计）人： | 唐克轩;付雪晴;石璞;刘萌;沈乾;颜廷祥;唐岳立;黎凌;孙小芬 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/82;A01H6/14 |
| 代理公司： | 上海旭诚知识产权代理有限公司 31220 | 代理人： | 郑立 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 启动子 非分泌型 次级代谢产物 基因工程育种 核苷酸序列 基因启动子 代谢产物 代谢调控 调控基因 特异表达 表达盒 基因 应用 发育 研究 生产 | ||
1.一种启动子，其特征在于，所述启动子是能调控基因在非分泌型腺毛中特异表达，其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
2.如权利要求1所述的启动子的应用，其特征在于，在利用植物非分泌型腺毛组织表达和生产代谢产物的基因工程育种中的应用；所述植物为青蒿。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述代谢产物为青蒿素。
4.一种载体，其特征在于，所述载体连接有如权利要求1所述的启动子。
5.一种制备高产青蒿素的转基因青蒿的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、根据青蒿基因组中AaPDR3基因启动子序列，利用巢式PCR克隆如权利要求1中所述的启动子的序列；
步骤二、将步骤一中获得的AaPDR3基因的所述启动子的序列连入pCAMBIA1391z载体，获得pCAMBIA1391Z-proAaPDR3载体；
步骤三、将步骤二中获得的pCAMBIA1391Z-proAaPDR3载体转化根癌农杆菌；
步骤四、将步骤三中获得的带有pCAMBIA1391Z-proAaPDR3载体的根癌农杆菌转化青蒿，并进行检测；
步骤五、确定所述启动子所引导的GUS报告基因在植株中的表达部位。
6.根据权利要求5所述的制备高产青蒿素的转基因青蒿的方法，其特征在于，所述启动子与青蒿素合成途径中的关键酶基因融合。
7.根据权利要求5所述的制备高产青蒿素的转基因青蒿的方法，其特征在于，所述巢式PCR的引物序列为：
第一轮PCR：PF1：5’-CTTTTCCAGCCAAATAAGTATGCCG-3’；
PR1：5’-TTCTTCCACTATTGCTCCCTAACCT-3’；
第二轮PCR：PF2：5’-TTTCTTTGGTGTTGTATCAATCTCTG-3’；
PR2：5’-TTCTTCCACTATTGCTCCCTAACCT-3’；
为构建pCAMBIA1391z-proAaPDR3载体，proAaPDR3两端分别引入了EcoRI的酶切位点和NcoI的酶切位点，使用的引物序列为：
EcoRI-Pro-PDR3-FP：5’-CGGAATTCGAACTGTTGAATTAGTATTTAC-3’；
Pro-PDR3-NcoI-RP：5’-CATGCCATGGTTTTAATGCTCAAAAAGCCC-3’。
8.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒包括如权利要求1所述的启动子。
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