[发明专利]一种利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法

权利要求书

1.一种利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法，其特征在于，所述利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法包括：

配制培养基：培养基成分包括1×MS营养元素，30g/L蔗糖、7g/L琼脂、2mg/L6-BA、0.2mg/LIBA；培养基用5mol/L的氢氧化钠调至pH＝5.5～6.5，高温湿热灭菌20～30分钟，后冷却至50℃时，分装在无菌组配瓶内，自然冷却凝固后备用；

组培苗培养：将接种的培养瓶密封瓶口，然后放置在25±1℃培养室内先暗培养3天，然后在16h/8h光暗交替下继续培养，在培养的第30天在掖芽基部切口处形成愈伤组织，第50天愈伤组织分化形成丛状新芽，第70天在新芽周围长出新根，形成高3cm的丛状香根草幼苗；

所述配制培养基后需要：

选取外植体：从生长健壮、无病虫害的香根草基部剪取具4个以上茎节的茎，去除叶、叶鞘和顶芽，在茎节上下1cm处用剪刀剪断，留下带掖芽的茎段作为外植体；

消毒外植体：取所修剪后茎段，放入去污液中并浸泡2h，然后用流水清洗浸泡后的茎秆2h；接着在工作台内再依次分别用75％酒精、0.1％升汞和5％的多菌灵浸没茎段消毒0.5、6和10分钟，最后用无菌水冲洗茎段4-6遍，于无菌滤纸上晾干后备用；

接种外植体：取消毒晾干后的茎段，在超净工作台内用无菌剪刀将掖芽基部0.1-0.3cm以上顶端部分剪去；用无菌解剖刀在茎节基部等距离纵切3个伤口，伤口深度0.1cm，伤口长度均为0.3cm；用无菌镊子将去除掖芽顶端且切伤后的茎段按自然生长方向插入培养基中，扎入深度为茎节基部刚好接触培养基上平面。

2.如权利要求1所述的利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法，其特征在于，所述去污液为1％洗衣粉的蒸馏水。

3.如权利要求1所述的利用愈伤组织繁殖香根草种苗的方法，其特征在于，所述组培苗培养后需要：

配制幼苗移栽培养基：营养土培养基由花土、壤土和沙按照1：1：1的比例配制，营养钵选用高度为25cm，钵底和钵口直径不小于5cm，混匀的营养土盛装在营养钵内，营养土培养基用量为营养钵高度的1/2，移栽前将装有营养土培养基的营养钵放置在自来水内，使营养土饱和吸水，然后再将营养钵自然控水5小时后备用；

幼苗的分离与移栽：从培养瓶内取出丛状香根草幼苗，去除连带在幼苗上的培养基残渣，用剪刀或镊子轻轻将具有独立根系的单个幼苗从丛状香根草幼苗上分离出来，然后将单个幼苗移栽到装有营养土培养基的营养钵内；

移栽苗的培养：剪取比营养钵口径稍大的透明薄塑料布块，并将其展开轻轻覆盖在移栽后的营养钵口上；然后将覆盖有塑料布的营养钵放置培养室内保湿培养7天，然后去掉塑料布继续培养60天，幼苗即可长至10-15cm大小，培养是条件是25±1℃、16h/8h光暗交替。