[发明专利]检测样品中是否存在五加科植物成分及是否掺伪的方法

权利要求书

1.一种检测样品中是否存在五加科植物成分的方法，该方法包括：

从待检样品中提取总DNA；

以所提取的总DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增；所述引物对包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；

SEQ ID NO：1：CGGAGGGGCGGATAATGG；

SEQ IDNO：2：CGCACGACATGAGAAGAGG；

对上述PCR扩增产物进行分析判断以鉴别所述检测样品中是否存在五加科植物成分；

所述对上述PCR扩增产物进行分析判断包括用凝胶电泳显示所述扩增产物，并包括对照从相应的五加科植物对照品中提取的DNA进行PCR扩增的结果。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述五加科植物选自三七、人参和/或西洋参。

3.一种鉴定待检三七样品中是否掺伪的方法，所述方法包括如下步骤：

从待检三七样品中提取总DNA；

以所提取的总DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增；所述引物对包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；

SEQ ID NO：1：CGGAGGGGCGGATAATGG；

SEQ IDNO：2：CGCACGACATGAGAAGAGG；

测试上述扩增结果的高分辨熔解曲线并进行分析判断待检三七样品是否掺伪。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，用于掺伪的伪品为人参和/或西洋参。

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述伪品为人参。

6.根据权利要求3所述的方法，其中，所述测试上述扩增结果的高分辨熔解曲线包括从40℃以上，以2～4.5℃/s的速度，升温至95℃，测试所述扩增结果的熔解曲线的过程。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，将上述扩增结果95℃变性1min，40℃复性30s，65℃保持1s，从65℃以4.4℃/s升温至95℃，在升温过程中采集信号。

8.根据权利要求3所述的方法，其中，所述从待检三七样品中提取总DNA的过程包括如下步骤：

在待检三七样品中加入液氮进行研磨；

加入用于提取植物DNA的含离子型表面活性剂的缓冲液，在60℃～70℃消化5min～4小时；

用氯仿法或酚仿法抽提；

加入醇溶剂沉淀富集DNA；

利用PCR纯化试剂盒进行纯化，得到所提取的总DNA。

9.根据权利要求3所述的方法，其中，所述PCR扩增为荧光定量PCR扩增；

PCR扩增条件为：95℃预变性5min；95℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸45s，扩增30个循环以上。

10.根据权利要求3所述的方法，其中，所述待检三七样品为中药细粉、中药最细粉或中药极细粉；

所述中药细粉指能全部通过五号筛，并含能通过六号筛不少于95％的粉末；

所述中药最细粉指能全部通过六号筛，并含能通过七号筛不少于95％的粉末；

所述中药极细粉指能全部通过八号筛，并含能通过九号筛不少于95％的粉末。

11.根据权利要求3～10中任一项所述的方法，该方法还包括：

将待检三七样品的高分辨熔解曲线与从三七对照品中提取DNA进行PCR扩增后测试得到的高分辨熔解曲线对照，分析判断待检三七样品是否掺伪；

当待检三七样品PCR产物的高分辨熔解曲线与三七对照药材PCR产物的高分辨熔解曲线具有基本相同的熔解特征时，表明待检三七样品未掺伪；

当待检三七样品PCR产物的高分辨熔解曲线与三七对照药材PCR产物的高分辨熔解曲线具有不同的熔解特征时，表明待检三七样品掺伪，当待检三七样品没有PCR产物检出时，表明样品中不含有三七药材。