[发明专利]PIK3R2在猪卵巢颗粒细胞中的应用

说明书

本发明公开一种PIK3R2在猪卵巢颗粒细胞的应用。本发明以PIK3R2为研究对象，合成PIK3R2干扰小片段，转染卵巢颗粒细胞，发现PIK3R2促进颗粒细胞凋亡，抑制颗粒细胞增殖，还通过调控其表达的miR‑126‑3p在颗粒细胞中的功能来进行研究；本发明补充外源干扰的PIK3R2后，验证能够回复由miR‑126‑3p引起的细胞功能表型，表明PIK3R2在颗粒细胞中是miR‑126‑3p的一个重要功能靶标，miR‑126‑3p可通过PIK3R2来调节颗粒细胞的发育。本发明通过PIK3R2和其靶向的miRNA在卵巢颗粒细胞的应用，对于研究卵巢卵泡闭锁机制具有很好的应用价值。

技术领域

本发明属于细胞工程和基因工程技术领域，具体涉及一种PIK3R2在猪卵巢颗粒细胞的应用。

背景技术

在商品猪肉生产中，母猪的利用年限直接关系到猪场的经济效益。影响母猪利用年限的因素主要有繁殖障碍、自然环境、品种、营养等，其中繁殖障碍是导致母猪过早从猪群中淘汰的最主要原因之一。在母猪繁殖障碍中卵巢的疾病是一个重要诱因。

卵巢是哺乳动物重要的生殖腺，是卵泡发育和排卵的重要繁殖器官。卵泡作为卵巢的基本组成单位，维持着卵子的存在、发育与闭锁。颗粒细胞是卵泡周围扁平或立方状细胞，其生长与分化在卵泡的发育过程中起着重要的调控作用。雌性哺乳卵巢中仅有少数卵泡能够发育成熟并排卵，而绝大部分卵泡在发育的各个阶段发生闭锁退化，其重要且直接原因来自于颗粒细胞的凋亡。颗粒细胞的凋亡是启动卵泡闭锁的重要机制。

磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)是一种脂类激酶的磷酸化磷脂酰肌醇及类似化合物，它作为第二信使在生长信号通路中具有重要作用。PIK3R2(p85β)是PI3K调节亚基p85之一，能够产生3-多磷酸肌醇。PI3KR2能够提高细胞胞膜上的PIP3(三磷酸肌醇)，是PI3K/Akt信号通路负性调控因子，众多研究表明PI3K/Akt信号通路与卵泡的发育有着密切的联系。

MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的一类内源的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20～25个核苷酸。它主要通过与靶基因mRNA的3′端非翻译区(UTR)完全或不完全配对而降解靶mRNA或抑制mRNA的正常翻译，进而对基因转录后表达进行调控。近年来，关于哺乳动物卵巢发育的miRNA调控也受到研究者关注，多项研究表明miRNA广泛参与卵子发生、卵泡发育、闭锁和黄体形成、退化等多个生物学过程。miRNA还参与一些卵巢疾病的调控，主要有卵巢癌和卵巢早衰。

该技术现在还只能在细胞水平和组织水平进行验证，无法进行活体猪个体 水平验证，导致该缺点的主要原因是动物的一种表型的变化受到多方面的影响，一个基因是否是控制该表型的主效基因还需要很多的研究来证实，并且靶基因与miRNA之间的关系是多对多，即一个基因也可以是多个miRNA的靶标，一个miRNA可以靶向多个基因，目前发现能控制表型的主效基因还甚少，即动物的一种表型变化，很难通过一个基因或者其靶标的miRNA来受到调控；其次，还没有较高把握成功的实验，用猪做活体实验的成本太高。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种PIK3R2在猪卵巢颗粒细胞的应用。

通过基因工程技术改变该PIK3R2基因在颗粒细胞的表达量，进而影响其对颗粒细胞增殖和凋亡；通过生物信息学软件预测该基因靶向的miRNA，研究miRNA的功能，来达到该PIK3R2基因在猪卵巢颗粒细胞中应用的目的。

本发明的另一目的在于提供抑制PIK3R2基因的RNA小干扰片段(siRNA)。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

本发明提供一种PIK3R2在猪卵巢颗粒细胞的应用。

本发明提供抑制PIK3R2基因的siRNA，序列如下：