[发明专利]一种液体中细菌的计数方法

说明书

本发明公开了一种液体中细菌的计数方法，包括如下步骤：取需要检测的溶液，选择三个连续级的10倍稀释梯度，得到三个稀释度溶液；从每个稀释度溶液中分别取三份样品得到A₁、A₂、A₃，形成液滴后逐滴滴下；用激光束从液滴一侧射入，从液滴中射出形成投影；获取每滴溶液的投影图像，对投影图像采用模式识别判断是否有细菌，采用MPN计数方法计算细菌数量；本发明耗时短、操作简便、易于实施，可广泛用于环境监测、食品安全和医疗卫生等领域对液体中细菌的检测。

技术领域

本发明涉及一种液体中的粒子计数方法，具体涉及一种液体中细菌的计数方法。

背景技术

细菌是自然界分布最广、个体数量最多的生命体，是构成自然界物质循环的主要部分；按照基本形态可分为球菌、杆菌和螺旋菌等。细菌广泛分布于环境中，人体身上也带有相当多的细菌；据估计，人体内及表皮上的细菌细胞总数约是人体细胞总数的十倍；细菌对环境、人类和动物既有用处又有危害，一些细菌作为病原体，可以导致霍乱、肺结核等疾病，也会导致植物产生疾病；细菌对人类的活动有很大的影响，例如酸奶的制作、抗生素的制造、废水的处理等，都与细菌有关，细菌在生物技术领域，也有广泛的应用；另外，某些细菌在环境监测、食品安全以及医疗卫生等领域也是重要检测指标，例如大肠杆菌的检测；传统的检测细菌的方法，例如涂布计数法，发酵法等方法操作复杂、耗时长并且误差大。

发明内容

本发明提供一种易于操作、快速和成本低的液体中细菌的计数方法。

本发明采用的技术方案是：一种液体中细菌的计数方法，包括如下步骤：

取需要检测的溶液，选择三个连续级的10倍稀释梯度，得到三个稀释度溶液；

从每个稀释度溶液中分别取三份样品得到A₁、A₂、A₃，形成液滴后逐滴滴下；

用激光束从液滴一侧射入，从液滴中射出形成投影；

获取每滴溶液的投影图像，对投影图像采用模式识别判断是否有细菌，采用MPN计数方法计算细菌数量。

进一步的，将液滴逐滴滴到超疏水材料上，激光束从液滴上部射入，分别进行投影。

进一步的，所述液滴采用蠕动泵通过导管将水样抽出形成。

进一步的，所述液滴通过注射器形成。

进一步的，所述激光束为可见光激光。

进一步的，所述MPN计数方法步骤如下：

每个液滴中有细菌标记为+，没有细菌标记为-；

每个稀释度的三份样品A₁、A₂、A₃中存在+，记为1，没有+，记为0；

将每个稀释度的三份样品的标记相加，为该稀释度的标记；

将三个稀释度的标记按顺序排列,形成一组三位数，检索MPN表中的排列查每毫升中细菌数量。

进一步的，操作过程在黑暗的环境中进行。

进一步的，获取投影图像之前，调整激光光束的位置，待细菌移动到液滴中央位置时，再获取投影图像。

进一步的，所述超疏水材料由四甲硅烷和含氟硅氧烷负载在玻璃上构成。

进一步的，溶液进行稀释之前，在溶液中添加细菌染色剂或者添加纳米粒子。

(1)本发明不需要进行细菌培养，结合微生物检测和光学现象，检测过程简单、分析过程快速；

(2)本发明采用的设备结构简单、成本低，可以对水样给出定性定量结果；