[发明专利]一种竹红菌甲素-转铁蛋白靶向给药体系的制备方法及其在光动力疗法中的应用

说明书

技术领域

本发明属于具有光动力活性的光敏剂技术领域，涉及一种通过金属键螯合偶联竹红菌甲 素光敏剂与靶向分子的方法，以及通过该方法制备得到的竹红菌甲素-转铁蛋白靶向给药体系 在光动力疗法中的应用。

背景技术

光动力疗法(photodynamictherapy，简称PDT)是近年来发展起来的一种新型肿瘤临 床疗法，因其抗瘤谱广、无严重副反应、微创以及经济方便等独特的优点受到广泛关注。尤 其对于那些属于癌症晚期和由于年龄、体质等原因不适合使用传统治疗技术的病人，光动力 疗法仍然是一种理想的治疗手段。光动力疗法主要通过使用适当波长的光源激发光敏剂产生 活性氧，活性氧通过一系列生理生化反应最终导致肿瘤细胞死亡。

竹红菌甲素(HypocrellinA，简称HA)具有光敏产生各种活性氧的能力。与目前已经商 品化的光敏剂(如血卟啉类衍生物)相比，其具有易得、易纯化、化学修饰性好、三重态量 子产率高、单重态氧量子产率高、光毒性高、体内代谢快等优点，在光动力抗艾滋病毒、治 疗肿瘤和微血管类疾病等方面有广泛的潜在应用价值。

然而，理想的光动力疗法药物除需具备较强的活性氧产生能力外，还需具备一定的肿瘤 组织靶向能力，这样才可以将光疗药物有效的运送至靶组织、靶器官、靶细胞以及细胞内的 特定部位，提高治疗效果，同时可以保护机体正常组织和细胞不受伤害。

在众多靶向系统中，受体介导的主动靶向系统因其具有高特异性、高选择性、饱和性、 亲合力强和生物效应明显等特点而受到广泛关注。利用配体为药物的载体，通过受体介导作 用，增加病灶局部药物浓度，提高疗效，降低毒副作用，达到靶向治疗目的。

转铁蛋白-转铁蛋白受体(Transferrin-TransferrinReceptor,Tf-TfR)受体介导的肿 瘤细胞靶向给药体系是近年来的研究热点。转铁蛋白(Tf)是人体血液中主要的含铁蛋白质， 负责体内铁的运输。铁是细胞生长增殖及机能活动所必需的微量元素之一，而肿瘤细胞主要 是通过高表达转铁蛋白受体(TfR)来摄取铁。肿瘤细胞表面大量表达的转铁蛋白受体为转铁蛋 白作为药物载体提供了可能。转铁蛋白与药物结合在一起，在组织中的分配性好，延长了药 物在胞浆中的半衰期，同时还可达到控释目的。

传统的转铁蛋白-药物给药体系(Tf-Drug)的构建主要是通过两种途径，一是通过偶联 反应形成药物与蛋白之间的西佛碱从而形成一个稳定的给药体系，但该化学反应过程会在一 定程度上影响转铁蛋白的构象及活性；而且，稳定化学键可能影响后期药物的释放过程。另 外一种方法是通过药物与蛋白之间简单的相互作用力，如静电力、疏水键、氢键等将蛋白与 药物连接，这种方法反应体系简单、对蛋白构象及活性影响小，但因为以上三种作用力强度 不高，因此该方法得到的给药体系在给药过程中往往发生所载药物从蛋白上脱落，造成给药 体系的崩解。

发明内容

本发明的目的在于克服竹红菌甲素不具有主动的肿瘤组织靶向的缺点，提供一种竹红菌 甲素靶向给药体系的制备方法，利用竹红菌甲素易与金属离子螯合的特点，通过金属键将竹 红菌甲素与转铁蛋白偶联，制备出具有临床应用前景的竹红菌甲素靶向给药体系，并将该靶 向给药体系应用于光动力疗法领域。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案是：

一种竹红菌甲素-转铁蛋白靶向给药体系的制备方法，其特征在于，采用全铁转铁蛋白作 为载体，在生理缓冲溶液中，使用尿素、β-巯基乙醇将全铁转铁蛋白失活，使其三维结构松 散露出Fe离子配位点后，将过量竹红菌甲素加入(优选按HA与Tf按2:1比例加入)，4℃ 恒温震荡10-24h，透析除掉未结合的竹红菌甲素(HA)及尿素、β-巯基乙醇，还原全铁转 铁蛋白三维结构，制得竹红菌甲素-转铁蛋白靶向给药体系。

上述竹红菌甲素-转铁蛋白靶向给药体系，是一种适合静脉注射的制剂，样品经冷冻干燥 后可获得冻干粉，使用之前用水溶解，溶解后可制成适合静脉注射的制剂。