[发明专利]一种鸭疫里默氏菌感染鸭的酶联免疫检疫方法有效
| 申请号： | 201610036604.0 | 申请日： | 2016-01-20 |
| 公开（公告）号： | CN105675862B | 公开（公告）日： | 2017-09-05 |
| 发明（设计）人： | 李继祥;范梦男;周琴;李昕;江胜;李欢 | 申请（专利权）人： | 西南大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京一格知识产权代理事务所(普通合伙)11316 | 代理人： | 滑春生 |
| 地址： | 402460 重庆*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鸭疫里默氏菌 感染 免疫 检疫 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种非诊断为目的鸭疫里默氏菌感染鸭的酶联免疫检疫方法，包括以下步骤：
(1)将鸭疫里默氏菌肽酶S8蛋白10.0μg/ml作为检测抗原在37℃振荡包被聚苯乙烯酶标板2小时；
(2)洗涤后用2％牛血清白蛋白在37℃封闭30分钟；
(3)洗涤，将待检血清用0.01M pH 7.4磷酸盐缓冲液按1:200稀释后加入酶标板孔反应45分钟；
(4)洗涤，加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗鸭IgG溶液反应45分钟；
(5)洗涤，加入TMB显色液避光反应15分钟；
(6)加入终止液后混匀，酶标仪在波长450nm测定吸光值(OD450值)，
其中，所述鸭疫里默氏菌为AF株或SC株。
2.如权利要求1所述的检疫方法，所述检测抗原为：(1)鸭疫里默氏菌肽酶S8基因的全基因或部分序列的原核和真核表达的重组蛋白或(2)从鸭疫里默氏菌培养物中分离纯化的肽酶S8蛋白及其片段。
3.如权利要求1所述的检测方法，步骤(2)至(5)中所述的洗涤，其洗涤液为含0.05％吐温-20的0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液。
4.如权利要求1所述的检测方法，步骤(2)中所述2％牛血清白蛋白，其稀释液为0.01M pH7.4磷酸盐缓冲液。
5.如权利要求1所述的检测方法，步骤(6)中所述终止液为2.0M硫酸。
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