[发明专利]AFM1荧光增敏剂

说明书

本发明公开了一种黄曲霉毒素M₁荧光增敏剂，由甲基‑β‑环糊精和含Hg²⁺的溶液组成，甲基‑β‑环糊精：AFM₁摩尔比为5.8×10⁵:1，Hg²⁺：AFM₁的摩尔比为6.6×10⁴:1。本发明所述Hg²⁺‑M‑β‑CD荧光增敏剂对黄曲霉毒素M₁荧光增强的效果显著，且反应快速。AFM₁待测溶液体系在0.01～2μg/L浓度范围内相关系数R可达到0.999以上，检出限为0.0026μg/L。本发明所述一种快速、灵敏、经济的荧光增强剂有望直接用于检测奶制品中的AFM₁，为AFM₁的快速检测提供了新思路和新途径。

技术领域

本发明属于化学分析领域，具体涉及一种用于黄曲霉毒素M₁荧光分析的荧光增敏剂。

背景技术

黄曲霉毒素M₁(Aflatoxin M₁，AFM₁)是哺乳动物摄入黄曲霉毒素B₁(Aflatoxin B₁，AFB₁) 污染的食物后，经肝脏细胞色素P450等相关酶代谢，发生II相反应形成的羟基化代谢产物，毒性仅次于AFB₁。1993年，AFM₁被世界卫生组织(WTO)国际癌症研究机构(IARC)列为2B类致癌物质，2002年被提至I类致癌物，其严重威胁到人体的健康。AFM₁主要存在于哺乳动物的乳汁、尿液等排泄物中，通常动物在摄入AFB₁12～24小时后即可检测出AFM₁。AFM₁污染主要存在于乳及乳制品中，而人类尤其是婴幼儿对乳制品的接触率极高，危害极大，因此世界各国对AFM₁的限量标准一直非常严格。CAC国际标准规定牛奶中的AFM₁限量为 0.5μg/kg，我国、美国和日本等很多国家也规定乳及乳制品中AFM₁限量标准为0.5μg/kg，欧盟制定的标准更为严格，乳及乳制品中限量为0.05μg/kg，婴幼儿配方奶以及改进配方奶中限量为0.025μg/kg，具有特殊医疗目的的婴幼儿食品中限量为0.025μg/kg。为保障乳品安全，AFM₁检测技术的灵敏度和准确性一直要求极高。

目前对于黄曲霉毒素的荧光增敏主要是对AFB₁、AFG₁等黄曲霉毒素借助光化学等衍生设备或三氟乙酸等强酸、卤族元素等强氧化剂、环糊精(CDs)等增强AFB₁、AFG₁的荧光强度或降低基质屏蔽、干扰作用达到提高灵敏度的目的，同时兼顾准确定量和快速检测，在常规实验室或者现场实地可以进行应用推广。其中，三氟乙酸通常作为高效液相色谱法柱前衍生试剂，具有毒性、强腐蚀性和极易挥发性，需要较严格的衍生条件和操作技术(如避光、高温等)；卤族元素等强氧化剂(饱和碘溶液、溴水、过溴化吡啶溴等)和光化学在线衍生的设备，通过衍生设备和一定的衍生条件将AFB₁、AFG₁这两种黄曲霉毒素的不饱和双键结构转化成饱和结构(AFB₁转化成AFB2a，AFG1转化成AFG2a)，衍生物富含大量羟基，且电子云与芳环上的π轨道平行，扩大了共轭双键体系，增强了AFs的天然荧光值，提高了检测的灵敏度，用于高效液相色谱在线检测或柱后衍生技术。AFM₁本身性质和结构与AFB₁、 AFG₁存在较大差异，缺少双键不饱和结构，这些技术无法对AFM₁实现衍生和荧光增敏效应。