[发明专利]一种鉴定芝麻细胞核雄性不育系的分子标记及其鉴定方法

权利要求书

1.一种鉴定芝麻细胞核雄性不育系的分子标记的扩增引物，其特征在于，所述分子标记的扩增引物为InDel70F和InDel70R，利用引物InDel70F和InDel70R对隐性纯合不育株扩增时，扩增片段长度为140bp、对显性纯合可育株扩增时，扩增片段长度为130bp、对显性杂合可育株扩增时，扩增片段为两条，其中一条的长度为140bp，另一条的长度为130bp，其中，所述引物InDel70F和InDel70R的序列如下：

InDel70F：5’-CCCCAACATCCATCCCCATCCT-3’；

InDel70R：5’-TGGTGTGATTAATGAAGCAAGCG-3’。

2.一种利用如权利要求1所述的分子标记的扩增引物鉴定芝麻细胞核雄性不育系的方法，其特征在于，包括以下步骤：

利用芝麻不育材料与芝麻可育材料进行杂交，F₁代自交产生F₂代分离群体；

提取芝麻不育材料、芝麻可育材料和F₂代分离群体的叶片总DNA；

开花期，进行雄性不育性鉴定，挑选不育与可育植株各50株，DNA等量混合，分别构建不育与可育混合池；

对父本、母本和两个混池的DNA分别进行酶切并进行测序；

通过在亲本和混池中开发SLAF标签，获得亲本中存在多态性的SLAF标签并进行关联分析；

以权利要求1所述分子标记的扩增引物，进行第一PCR扩增，获得扩增片段，若扩增片段长度为140bp，则为隐性纯合不育株；若扩增片段长度为130bp，则为显性纯合可育株；若扩增片段为两条，其中一条的长度为140bp，另一条的长度为130bp，则为显性杂合可育株。

3.如权利要求2所述的鉴定芝麻细胞核雄性不育系的方法，其特征在于，所述进行第一PCR扩增的扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃保温10min，16℃保存。

4.如权利要求2所述的鉴定芝麻细胞核雄性不育系的方法，其特征在于，所述进行第一PCR扩增的反应体系为：100mg/l DNA模板2μl，引物正向和反向各0.5μl，10×bufferl μl，10mM dNTP 0.1μl，taq酶0.1μl，加ddH₂O至10μl。

5.如权利要求2-4任一所述的鉴定芝麻细胞核雄性不育系的方法，其特征在于，所述对父本、母本和两个混池的DNA分别进行酶切并进行测序的步骤包括：对得到的酶切片段进行3′端加A处理、连接Dual-index测序接头、第二PCR扩增、纯化混样、切胶选取目的片段，文库质检合格后用Illumina HiSeqTM 2500进行测序。

6.如权利要求5所述的鉴定芝麻细胞核雄性不育系的方法，其特征在于，所述通过在亲本和混池中开发SLAF标签，获得亲本中存在多态性的SLAF标签并进行关联分析的步骤包括：通过reads间聚类的方法，在亲本和混池中开发SLAF标签，获得亲本中存在多态性的SLAF标签。

7.如权利要求5所述的鉴定芝麻细胞核雄性不育系的方法，其特征在于，所述第一PCR扩增和所述第二PCR扩增的PCR产物用9％的非变性聚丙烯酰胺凝胶，于200V恒功率电泳分离，通过银染显色观察结果。