[发明专利]水杨酸钠在发酵制备普鲁兰酶过程中的应用

说明书

技术领域

本发明属于发酵制备普鲁兰酶技术领域，具体涉及水杨酸钠在发酵制备普鲁兰酶过程中的应用的专利申请。

背景技术

普鲁兰酶(EC 3.2.1.41)专一性地水解支链淀粉分支点中的α-1,6糖苷键，由于其能将最小单位的支链分解，最大限度的利用淀粉原料，因此在以淀粉为原料的食品发酵加工业中有着重要的用途，广泛应用于高葡萄糖浆、超高麦芽糖浆、啤酒及改性淀粉等的生产中。

克雷伯氏菌是目前普鲁兰酶的主要产生菌，然而，克雷伯氏菌在生长过程中合成的荚膜多糖则不利于普鲁兰酶发酵生产，既消耗了培养基中的营养物质，增加了培养基的粘度，降低了发酵液的溶氧速率，影响发酵产酶，也给酶的提取纯化带来困难。因此，减少克雷伯氏菌荚膜多糖的合成，将有利于提高普鲁兰酶的发酵生产。然而如何抑制克雷伯氏菌荚膜多糖的生成，及抑制荚膜多糖合成后普鲁兰酶的酶活等特性的改变情况尚未见到较为详细的研究报道。

发明内容

本发明目的在于提供水杨酸钠在发酵制备普鲁兰酶过程中的新应用，从而能够较好提高普鲁兰酶的酶活。

本发明所采取的详细技术方案如下所述。

水杨酸钠在发酵制备普鲁兰酶过程中的应用，利用克雷伯氏菌发酵制备普鲁兰酶的过程中，将水杨酸钠添加于产酶培养基中，可提高所制备的普鲁兰酶的酶活；产酶培养基中水杨酸钠浓度为大于0，但不超过100 μM；水杨酸钠浓度具体例如为大于0并不超过50μM、10μM、20μM、30μM、40μM、60μM、70μM、80μM、90μM、10μM~50μM、30μM~50μM、50μM~100μM等等。

所述克雷伯氏菌具体例如为中国普通微生物菌种保藏管理中心（北京）保藏编号为：CGMCC NO.10357的克雷伯氏菌菌株。

所述产酶培养基，以w/v表示，配方为：糯米粉 0.5%，蛋白胨 0.5%，KH₂PO₄ 0.05%，MgSO₄·7H₂O 0.01%，pH自然。

利用克雷伯氏菌发酵制备普鲁兰酶的过程中，发明人认为，水杨酸钠能够抑制克雷伯氏菌荚膜多糖的合成，因而可以提高发酵液中的普鲁兰酶的酶活。实际检测结果表明，在普鲁兰酶产酶培养基中加入适量的水杨酸钠，显著提高了所制备的普鲁兰酶的酶活，表现出了较好的应用效果，因而具有较好地推广应用前景。

附图说明

图1 为产酶培养基中不同水杨酸钠终浓度的发酵液酶活，其中1、2、3、4、5、6分别表示水杨酸钠的终浓度为0μM、50μM、100μM、200μM、500μM、1000μM，“*”表示与对照组有显著差异（p<0.05）。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的解释说明。在介绍具体实施例前，对下述实施例中所涉及部分物料情况简要说明如下。

菌株：下述实施例中所用克雷伯氏菌菌株，目前保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（北京），保藏编号为：CGMCC NO.10357，该菌株的原始菌株由发明人筛选获得，因此发明人保藏有该菌株的备份。

试剂：

水杨酸钠母液（16.01 mg/ mL，即1 mol/L）：1.601g水杨酸钠溶于100毫升灭过菌的蒸馏水中；使用时根据需要将水杨酸钠母液稀释成相应浓度即可；

0.5%普鲁兰糖溶液：称取0.5g普鲁兰糖加入到100ml蒸馏水中；

3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：将3.15 g DNS（3,5-二硝基水杨酸，化学纯）溶于131 mL、2M NaOH热溶液中（10.48g NaOH溶于131mL蒸馏水中），加入250 mL酒石酸钾钠热溶液（91 g 酒石酸钾钠溶于250 mL 蒸馏水中），再加2.5 mL苯酚（固体加热）和2.5 g Na₂SO₃，溶解后定容到500 毫升的棕色瓶中，放置7天后使用。

培养基：

斜面培养基采用LB(Luria-Bertani)培养基（w/v）：胰蛋白胨 1%，酵母提取物 0.5 %，NaCl 1 %（固体培养基含2.0%琼脂粉）；

种子培养基（w/v）：蛋白胨1.0%，牛肉膏0.3%，NaCl 0.5%，pH 6.0；

产酶培养基（w/v）：糯米粉 0.5%，蛋白胨 0.5%，KH₂PO₄ 0.05%，MgSO₄·7H₂O 0.01%，pH自然；