[发明专利]一种土壤过氧化物酶活性测定试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种土壤过氧化物酶活性测定试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：

试剂一，粉剂×1瓶，4℃保存，由一定量的邻苯三酚组成，置于10mL试剂瓶中；

试剂二，液体×1瓶，4℃保存，由一定量的过氧化氢与蒸馏水混匀而成，置于2mL试剂瓶中；

试剂三，液体×1瓶，4℃保存，由柠檬酸-磷酸缓冲液组成，置于5mL试剂瓶中；

试剂四，液体×1瓶，4℃保存，由乙醚组成，置于100mL试剂瓶中。

2.根据权利要求1所述的土壤过氧化物酶活性测定试剂盒，其特征在于：

所述试剂一中的邻苯三酚的质量为0.125g；

所述试剂二中的过氧化氢的体积为50uL，蒸馏水的体积为1.95mL；

所述试剂三中的柠檬酸-磷酸缓冲液的pH=4.5，所述的柠檬酸-磷酸缓冲液是由57.4mg一水合柠檬酸、162.6mg十二水合磷酸氢二钠和5m蒸馏水混匀而成；

所述试剂四中的乙醚的体积为100mL。

3.一种采用如权利要求2所述的试剂盒的土壤过氧化物酶活性测定方法，其特征在于，基于分光光度法，包括以下步骤：

步骤1仪器和用品的准备；

可见分光光度计或酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿或96孔板、50mL乙醚、研钵、冰和蒸馏水；

步骤2试剂的配制；

所述试剂一在临用前加10mL蒸馏水充分溶解，制成试剂一水溶液；

步骤3分光光度计或酶标仪的预热；

分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至430nm，蒸馏水调零；

步骤4土壤过氧化物酶活性的测定操作；

取一支1.5mLEP管，作为测定管，在其中加入0.02g风干土样、100μL所述试剂一水溶液、20μL所述试剂二，振荡混匀，30℃恒温培养1h；再加入50μL所述试剂三和430μL所述试剂四，振荡数次，室温静置30min，取200μL上层液，于430nm处测定吸光值A；

步骤5土壤过氧化物酶活性的计算；

1）用微量石英比色皿测定，其计算公式如下：

土壤过氧化物酶活性（U/g土样）=（A+0.003）÷8.97×V_反总÷W÷T=80×（A+0.003）；

其中，T=1h=1/24d，表示反应时间；

V_反总=0.6mL，表示反应体系总体积；

W=0.02g，表示样本质量；

2）用96孔板测定，其计算公式如下：

土壤过氧化物酶活性（U/g土样）=（A+0.003）÷4.485×V_反总÷W÷T=160×（A+0.003）；

其中，T=1h=1/24d，表示反应时间；

V_反总=0.6mL，表示反应体系总体积；

W=0.02g，表示样本质量。