[发明专利]一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法

说明书

技术领域

本发明属化学分析测试技术领域，具体涉及一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法，它是一种新的检测方法。

背景技术

铜绿假单胞菌(Pseudomonase aeruginosa,PA)，属革兰氏阴性杆菌，在水、空气、土壤及生命有机体的皮肤、呼吸道和肠道等中广泛分布，据调查，该菌是医院内感染的主要病原菌之一，感染后可引发皮肤病、肺炎、肠道疾病、脑膜炎和败血症等，严重时可导致死亡。研究表明，铜绿假单胞菌群体效应(quorum sensing,QS)系统的信号分子N-(3-oxododecanoyl)homoserine lactone(3OC₁₂-HSL)在调控铜绿假单胞菌绝大部分毒力因子的表达中起重要作用，而铜绿假单胞菌产生的各种严重感染与其毒力因子的释放密切相关。当铜绿假单胞菌数目较低时，仅产生基础水平的信号分子，随着铜绿假单胞菌在局部不断生长，信号分子可在局部环境达到一定的浓度，当其浓度达到阀值时，便激活铜绿假单胞菌中相关毒力因子的表达，增强铜绿假单胞菌的致病性，导致生命体感染。因此，开发快速和灵敏的准确检测铜绿假单胞菌的方法对生命体的健康具有重要意义。

目前，在铜绿假单胞菌的检测方面，需要纯培养和生化鉴定等多个步骤，操作繁琐、检测周期长、灵敏度低，且不能满足快速检测的需求。信号分子的浓度与铜绿假单胞菌的数目相关，通过对铜绿假单胞菌中信号分子浓度的测定，可以达到监测铜绿假单胞菌生长数量的目的。铜绿假单胞菌中信号分子具有多个金属离子结合位点(如O、N)，根据信号分子与金属离子的结合，从而检测铜绿假单胞菌中信号分子的研究还未见报道。

基于上述问题，本发明致力于开发简便、快速和灵敏的检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法。通过紫外-可见吸收光谱，利用铜离子溶液，实现对铜绿假单胞菌中信号分子的定量检测。本发明不仅方法简便,而且在灵敏度、响应时间以及生物应用等方面均有突出优点。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法。

本发明的技术方案如下：

1.一种检测铜绿假单胞菌中信号分子N-(3-oxododecanoyl)homoserine lactone(3OC₁₂-HSL)的新方法，铜绿假单胞菌中信号分子与Cu²⁺配位结合后，具有如下结构式：

2.一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法，包括下列步骤：

在DMSO与H₂O体积比例为4:1的混合溶剂中，加入初始浓度为1.0mM的CuCl₂·2H₂O，然后，依次加入不同量的初始浓度为1.0mM的铜绿假单胞菌中信号分子，使得溶液中Cu²⁺的浓度为5.0x10^-4M，铜绿假单胞菌中信号分子的浓度分别为1.0μM、2.0μM、5.0μM、10.0μM、20.0μM、50.0μM、100μM、200μM、300μM、400μM、500μM，不加入信号分子作为对照，静置30min体系达到平衡，用紫外-可见吸收光谱仪测试不同浓度铜绿假单胞菌信号分子条件下的紫外-可见吸收光谱，以紫外-可见吸收光谱中277nm和280nm处吸收峰强度明显改变的方式检测铜绿假单胞菌中信号分子；所述DMSO与H₂O混合溶剂的pH值通过滴加盐酸和氢氧化钠调节检测体系的pH至6.5。

上述一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法，应用于Cu²⁺的CH₃OH/H₂O溶液中铜绿假单胞菌中信号分子的检测，以紫外-可见吸收光谱中277nm处吸收峰强度明显改变的方式检测铜绿假单胞菌中信号分子。

上述一种检测铜绿假单胞菌中信号分子的方法，应用于Cu²⁺的DMF/H₂O溶液中铜绿假单胞菌中信号分子的检测，以紫外-可见吸收光谱中280nm处吸收峰强度明显改变的方式检测铜绿假单胞菌中信号分子。

本发明中，上述Cu²⁺的DMSO/H₂O、CH₃OH/H₂O和DMF/H₂O溶液中能够定量检测铜绿假单胞菌中信号分子，该Cu²⁺的溶液本身在280nm左右处没有紫外-可见吸收峰，当与信号分子结合后，在280nm左右处的紫外-可见吸收峰显著增强。