[发明专利]用于鉴定普通狗牙根和弯穗狗牙根的SRAP分子标记引物及其方法和应用

权利要求书

1.一种SRAP分子标记引物，其特征在于，选自下述引物组合之一：E1M4、E1M5、E1M6、E1M7、E1M8、E2M3、E2M4、E2M5、E2M6、E2M7、E3M1、E3M3、E3M4、E3M6、E3M9、E4M1、E4M3、E4M4、E4M5、E4M6、E5M9、E6M1、E6M2、E6M3、E6M4、E6M7、E6M8、E6M9、E7M2、E7M3、E7M4、E7M5、E7M7、E10M9，其中，

E1为反向引物，序列如SEQIDNO：1所示；

E2为反向引物，序列如SEQIDNO：2所示；

E3为反向引物，序列如SEQIDNO：3所示；

E4为反向引物，序列如SEQIDNO：4所示；

E5为反向引物，序列如SEQIDNO：5所示；

E6为反向引物，序列如SEQIDNO：6所示；

E7为反向引物，序列如SEQIDNO：7所示；

E10为反向引物，序列如SEQIDNO：10所示；

M1为正向引物，序列如SEQIDNO：11所示；

M2为正向引物，序列如SEQIDNO：12所示；

M3为正向引物，序列如SEQIDNO：13所示；

M4为正向引物，序列如SEQIDNO：14所示；

M5为正向引物，序列如SEQIDNO：15所示；

M6为正向引物，序列如SEQIDNO：16所示；

M7为正向引物，序列如SEQIDNO：17所示；

M8为正向引物，序列如SEQIDNO：18所示；

M9为正向引物，序列如SEQIDNO：19所示。

2.根据权利要求1所述的SRAP分子标记引物，其特征在于，选自下述引物组合之一：E2M3、E2M4、E2M5、E2M7、E3M3、E3M6、E4M3、E4M4、E4M5、E4M6、E5M9、E6M1、E6M2、E6M4、E6M7、E6M8、E6M9、E7M3、E7M4、E7M5、E7M7、E10M9。

3.权利要求1或2中所述的SRAP分子标记引物在鉴定普通狗牙根和弯穗狗牙根中的应用。

4.一种利用SRAP分子标记引物组合鉴定普通狗牙根和弯穗狗牙根的方法，其特征在于，采用权利要求1或2中所述的SRAP分子标记引物，对普通狗牙根和弯穗狗牙根DNA进行扩增、检测和分析。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，DNA提取步骤如下：

1)液氮保护下磨样成粉；

2)立刻加入预冷的CTAB-free缓冲液，冰浴5～15min；

3)离心，去掉上清液；

4)加入预热至50-80℃的3×CTAB提取缓冲液，50-80℃的水浴30-50min；

5)离心，取上清液，加入有机溶剂洗涤后，取水层，干燥。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，每100ml的3×CTAB提取缓冲液中含有：3％CTAB(W/V)2～4g，NaCl8～10g，EDTA2～3mmol和Tris-HCl8～12mmol，pH为7.5～8.5。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，每100ml的CTAB-free缓冲液中含有：NaCl1～2g，ddH₂O40～60ml，EDTA4～6mmol和Tris-HCl18～22mmol，β-巯基乙醇0.8～1.2ml，PVP1.5～2.5g，pH为7.5～8.5。