[发明专利]一种基于唾液中的孕酮的核酸适配体及检测用金标试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及激素检测技术领域，具体涉及一种基于唾液中的孕酮的核酸适配体及 检测用金标试纸条。

背景技术

孕酮(progesterone)亦称黄体酮，是天然的孕激素，由卵巢和胎盘产生，分子量为 314.46，它与雌激素共同维持女性生殖周期及女性生理特征。动态监测血清中的孕酮含量， 有助于判定排卵期，了解黄体功能，研究各种类固醇避孕药及抗早孕药的作用机理。此外， 近年来研究表明，孕酮的作用已远超出生殖功能的范畴，它不仅可在神经系统中合成分泌， 还能影响神经系统的结构和功能。

孕酮与人体的内分泌调整密切相关，孕酮在女性的不同生理周期阶段起着关键的 调节作用，孕酮的失调会直接影响人体健康。所以检测人体孕酮浓度是女性健康诊断的重 要指标。在现有的孕酮检测方法中一般都是基于尿液或者血液来检测，在取样的过程中给 用户带来了不便或痛苦。

由于孕酮对人身心健康的重大影响，医学、生物、环境及食品安全等各领域对该物 质进行了深入研究，并建立了多种测定方法。目前孕酮的检测方法大致可以分为两类：色谱 法和免疫分析法。色谱法作为检测血清中孕酮的标准方法，在准确性、选择性、重现性、灵敏 度等方面具有无可比拟的优势，但同时也存在一些局限性：如仪器昂贵，操作技术要求高， 需要复杂的样品前处理等。因此，在临床检测中，色谱法不能满足快速、简便、低成本、高通 量的要求。而免疫分析方法具有特异性好、简便、低成本等优点，是目前临床检测孕酮的主 要方法。放射免疫分析(radioimmunoassay，RIA)、酶联免疫分析(enzymelinked immunoadsorbentassay，ELISA)、荧光免疫分析(fluoroimmunoassay，FIA)、时间分辨荧 光免疫分析(timeresolvedfluoroimmunoassay，TRFIA)和化学发光免疫分析 (chemiluminescenceimmunoassay，CLIA)用于人血清中孕酮的检测都有报道。RIA使用放 射性核素，污染环境，有效期短，测量时间长，这些缺点限制了其进一步的应用。ELISA和FIA 的灵敏度较低，不利于血清中低浓度孕酮的测定。TRFIA和CLIA克服了以上方法的缺点，国 外已经实现了分析技术完全自动化，但这些进口的诊断试剂往往需要专门配套的仪器，试 剂、仪器价格昂贵；此外，其专利保护也限制了这些技术在我国国内的研发。

中国专利申请公布号CN102095866A(公开日2011.06.15)公开了一种孕酮化学发 光定量检测试剂盒，包括孕酮检测反应板，反应板包被有孕酮抗体，还包括酶结合物、发光 底物、校准品、质控品和浓缩洗涤液。其适用的检测样本仍然为血清或血浆。

传统的各种检测方法，过程复杂，耗时长，成本高，并且不能保证批间的稳定性。

发明内容

为了解决现有检测技术中的上述问题，本发明基于胶体金标记适配体识别孕酮特 异性抗原的技术原理，提供了一种孕酮的核酸适配体，其相应的互补探针，以及由其组成的 金标试纸条。

本发明提供的一种孕酮的核酸适配体，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，其中序 列5’端经过巯基修饰。该核酸适配体能够特异性识别孕酮并与其结合。

SEQIDNO:15’-SH-GGCACGGCAAAGGGGTACAGCCTACCGAACCGTGGCTGTAAGGGTGGTTGTG GTGTG-3’。

本发明提供的一种互补探针A，与上述孕酮的核酸适配体互补配对，其核苷酸序列 如SEQIDNO:2所示，其中序列5’端经过生物素修饰。互补探针A能够与孕酮竞争性结合上 述核酸适配体。

SEQIDNO:25’-biotin-CACACCACAACCACC-3’。

本发明提供的一种互补探针B，与上述孕酮的核酸适配体互补配对，其核苷酸序列 如SEQIDNO:3所示，其中序列5’端经过生物素修饰。互补探针B能够与上述核酸适配体的 另外一部分结合，该部分不同于与孕酮结合的序列段，也就是说，互补探针B与孕酮之间没 有竞争关系。

SEQIDNO:35’-biotin-CACACCACAACCACCCTTACAGCCACGGTT-3’。