[发明专利]一种快速检测丝状真菌合成低聚果糖能力的平板显色方法

说明书

本发明公开了一种快速检测丝状真菌合成低聚果糖能力的平板显色方法，是将待测的丝状真菌和标准菌的新鲜孢子悬液点种于察氏固体培养基的平板上，各菌株孢子之间点种距离不小于2cm，30℃培养5h，将葡萄糖检测液直接倒在以上长有菌落的平板上，并使其均匀覆盖平板上的所有培养基表面，40℃静置10min，观察菌落周围形成的红色晕圈，比较待测菌株与标准菌株形成的红色晕圈的大小，若红色晕圈比标准菌株形成的大即可判定该待测菌株合成低聚果糖能力强，若红色晕圈比标准菌株形成的小即可判定该待测菌株合成低聚果糖能力弱。本发明方法操作简单，成本低廉，是一种简便、高效、可靠的适用于鉴定丝状真菌合成低聚果糖能力的方法，具有工业应用价值，值得推广。

技术领域

本发明涉及检测丝状真菌合成低聚果糖能力的方法，属于检测技术领域。具体地说是涉及一种快速检测丝状真菌合成低聚果糖能力的平板显色方法。

背景技术

低聚果糖(Fructo-oligosaccharides，简写为FOS)又称功能性果寡糖，是一种典型的益生元物质，广泛存在于洋葱、菊芋、香蕉、梨、小麦和蜂蜜等天然产物中，目前在国内外已被广泛地应用于药品、食品、保健品、饲料等产品的开发和生产中。其分子式为G-F-Fn(G为葡萄糖，F为果糖，n＝1～3)，是蔗糖分子上以β-1，2糖苷键结合数个D-果糖所形成的蔗果三糖(GF₂)、蔗果四糖(GF₃)、蔗果五糖(GF₄)及其混合物的总称，结构式如下。

低聚果糖甜度是蔗糖的0.3-0.6倍，既保持了蔗糖的纯正甜味性质，又比蔗糖甜味清爽。低聚果糖具有重要的生理学功能：促进肠道益生菌如双歧杆菌的增殖、减少和抑制肠内腐败物质的产生、降低胆固醇和甘油三酯水平、促进人体内维生素B族合成及钙离子吸收等，同时又具有低热值、防龋齿、提高免疫力和抗病力等功能，所以近年来人们对低聚果糖的关注和需求与日俱增。

人们对低聚果糖的大量需求，使得低聚果糖产业得以发展。但是天然蔬菜和水果中低聚果糖含量非常有限，不利于提纯和生产，因此，工业上一般采用具有低聚果糖合成酶活性(果糖基转移酶，Fructosyltransferase，FTase，EC 2.4.1.9；β-呋喃果糖苷酶，β-fructofuranosidase，Ffase，EC 3.2.1.26)的微生物进行发酵，以蔗糖为原料合成具有高附加值的低聚果糖。酶法合成过程中，一分子蔗糖作为供体，一分子蔗糖作为受体，酶作用于供体蔗糖断裂α-1，2糖苷键生成果糖基和葡萄糖，果糖基在转移酶作用下以β-1，2糖苷键形式连接到受体蔗糖分子上形成蔗果三糖，以此方式继续生成蔗果四糖和蔗果五糖，每添加一分子果糖基的同时释放出一分子葡萄糖。所以，葡萄糖含量的多少间接反映了微生物合成低聚果糖能力的强弱。相关文献报道，具有低聚果糖合成酶活性的微生物包括丝状真菌、酵母和细菌，其中具有低聚果糖合成酶活性的丝状真菌较为普遍，包括黑曲霉(Aspergillus niger)、日本曲霉(Aspergillus japonicus)、棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、出芽短梗霉(Aureobasium pullulans)等十几种，但其仅有少数几种产生的低聚果糖合成酶能够应用于工业上大量生产低聚果糖，因此，加快低聚果糖产业发展的研究重点是进一步筛选具有较高低聚果糖合成酶活性的优良丝状真菌。

目前，检测和比较丝状真菌合成低聚果糖能力的方法主要有：3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)、薄层层析分离法(TLC法)和高效液相色谱法(HPLC法)等。这些方法操作过程复杂、耗时长且成本高(如色谱法)，大大减缓了工业用生产低聚果糖丝状真菌的筛选进程。所以，研发一种能够快速衡量丝状真菌合成低聚果糖能力的检测方法甚为关键。经检索，有关基于培养基平板并利用双酶法定性检测葡萄糖的产生而间接反映丝状真菌合成低聚果糖能力的检测方法在相关专利和文献中还未见报道。

发明内容

针对现有技术述的不足，本发明的目的是提供一种快速检测丝状真菌合成低聚果糖能力的平板显色方法。