[发明专利]一种桃胶多糖降解产物PGP‑1及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于桃胶多糖制备技术领域，更具体地，涉及一种桃胶多糖降解产物PGP-1及其制备方法和应用。

背景技术

桃胶为蔷薇科植物桃或山桃树皮中分泌出来的树脂。关于桃胶的药用价值，中医古籍广有记载。桃胶性平，味甘苦，擅长活血消肿、通淋止痛，止渴、消渴。临床运用对血淋、石淋、糖尿病等症均有良效。

我国桃胶资源丰富，是一种优质的中药资源。国内外均有关于桃胶多糖组成的报道，但是天然多糖的酶水解一直以来都是世界性难题，高效多糖水解酶菌株的筛选及相关研究一直备受人们的关注。由于多糖空间构象的位阻作用，单一酶很难将多糖完全解聚。由于桃胶本身短螺旋结构的保护及侧链所产生的位阻，使得一般的阿拉伯半乳聚糖水解酶如半乳糖苷酶、阿拉伯糖苷酶和半乳糖醛酸酶等都很难将其降解。本课题组采用前期研究的成果，采用具有分解桃胶能力的微杆菌A5在桃胶培养基中诱导产酶的方法来水解桃胶多糖，并进行分离纯化，期望得到一种经过酶解后的产物，能够展现更高的生物学活性，从而为桃胶多糖的进一步提取和应用提供技术支持。

发明内容

本发明根据目前桃胶多糖提取技术中的不足，提供了一种桃胶多糖降解产物PGP-1及其制备方法和应用。

本发明的技术目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种桃胶多糖降解产物PGP-1，所述PGP-1中不含有中性多糖，所述PGP-1的分子量分布在1×10⁵～1×10⁶范围内，所述PGP-1由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半半乳糖组成；所述阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半半乳糖的摩尔比为 0.637:0.054:0.073:0.022:0.556。

本发明所述桃胶多糖降解产物PGP-1的制备方法，包括如下步骤：

S1. 将菌种活化，得到种子液；

S2. 将S1中所得种子液接种至桃胶培养基，进行发酵培养，S2中发酵温度为20~40℃，初始桃胶浓度4~8%，培养基pH为4~6，摇床转速为160~200rpm，得到发酵液；

S3.将S2中所得发酵液进行分离纯化，得到所述PGP-1；

所述S1中菌种为微杆菌A5，所述微杆菌A5于2009年8月7日保存于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M209174；

所述S3中包括如下步骤：

S31.将S2中所得发酵液离心，得到桃胶多糖液，然后过滤，依次将过滤产物经过脱蛋白、醇沉、冷冻干燥后，得到冷冻干燥产物；

S32.将S31中所得干燥产物经过阴离子交换、浓缩、透析、除杂、冷冻干燥后即得所述PGP-1。

本课题组采用前期研究的成果，在特定酶解条件下，采用具有分解桃胶能力的微杆菌A5在桃胶培养基中诱导产酶的方法来水解桃胶多糖，并结合分离纯化工艺，提取得到了桃胶多糖PGP-1。

经菌体降解后获得的多糖产物中会有培养基来源的无机盐及醇不溶的小分子等杂质，以及菌体及菌体分泌的蛋白及其它代谢产物。可按分子大小和形状分级（如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等），也可按分子所带基团的性质分级（如按电荷性质分级的电泳、离子交换层析等）进而对多糖降解产物进行分离提取。

同时，本发明中发现，PGP-1经过DEAE-Cellulose 52阴离子交换柱的方式可以获得，但是经过Sephadex G200柱层析和有机溶剂洗脱的分离方式不能将经过发酵后的桃胶粗多糖产品分离开来。

优选地，所述阴离子交换中使用的交换柱为DEAE-Cellulose 52，洗脱为采用NaCl溶液进行梯度洗脱。

更优选地，所述NaCl溶液的梯度洗脱浓度分别为0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.5mol/L、0.6mol/L、0.7mol/L、0.8mol/L、0.9mol/L、1.0mol/L。

优选地，所述S2中发酵温度为30℃，初始桃胶浓度8%，培养基pH为4，摇床转速为160rpm，接种量为3%。。

优选地，所述S1中菌种活化为将所述菌种在4℃保存斜面菌种，营养琼脂平板划线，37℃倒置培养24h，从平板挑单克隆转接到LB试管培养基，于200rpm转速，37℃下震荡培养12h。

优选地，所述S31中脱蛋白采用Sevage法脱蛋白，所述S31中醇沉为采用75%的乙醇；

所述S32中浓缩为采用聚乙二醇8000进行浓缩处理，所述透析为采用截留分子量200的透析袋。

本发明中发酵液的分离纯化步骤如下所示：