[发明专利]一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法

权利要求书

1.一种快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征是，该方法包括如下步骤：

（A）黄曲霉毒素B1核酸适体Apt与单链信号探针ssDNA杂交，形成杂交链；

（B）使该杂交链与待测样品作用，当待测样品中有黄曲霉毒素B1存在时，杂交链选择性地与黄曲霉毒素B1反应释放出单链信号探针ssDNA；

（C）为了消除杂交链的干扰，利用DNA扩增，使杂交链成双链DNA，然后用外切酶，将双链DNA水解成单核苷酸而除去双链DNA，留下单链信号探针ssDNA；

（D）利用黄曲霉毒素B1核酸适体-黄曲霉毒素B1结合体不能诱导铜离子还原生成近红外荧光的铜纳米粒子，只有单链信号探针ssDNA能够诱导铜离子还原成近红外荧光铜纳米粒子，检测体系的荧光强度，从而测定待测样品中的黄曲霉毒素B1的含量。

2.根据权利要求1所述的快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征是，所述黄曲霉毒素B1核酸适体为5’-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3’。

3.根据权利要求1或2所述的快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征是，所述的单链信号探针ssDNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGGGCCTAGCG-3’。

4.权利要求1所述的快速检测黄曲霉毒素B1的方法，包括检测黄曲霉毒素B1的试剂盒，其至少包括：黄曲霉毒素B1核酸适体、单链信号探针ssDNA、DNA扩增体系、核酸外切酶、铜离子还原检测体系。

5.根据权利要求4所述的快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征是，所述黄曲霉毒素B1核酸适体为5’-GTTGGGCACGTGTTGTCTCTCTGTGTCTCGTGCCCTTCGCTAGGCCCACA-3’。

6.根据权利要求4所述的快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征是，所述的单链信号探针DNA为5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGGGCCTAGCG-3’。

7. 根据权利要求4所述的快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征是，所述DNA扩增体系包括缓冲溶液、dNTP和Phi29 DNA 聚合酶; 所述缓冲溶液由Tris-HCl、MgCl₂、 (NH₄)₂SO₄组成。

8. 根据权利要求4所述的快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征是，所述核酸外切酶为Exo III核酸外切酶。

9.根据权利要求4所述的快速检测黄曲霉毒素B1的方法，其特征是，所述的铜离子还原检测体系中还原剂为维生素C。