[发明专利]一种同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的引物及其方法在审
| 申请号： | 201610043845.8 | 申请日： | 2016-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN105525003A | 公开（公告）日： | 2016-04-27 |
| 发明（设计）人： | 刘菲菲;于世辉;燕启江;胡昌明;梁耀铭;赵薇薇;郭周萍 | 申请（专利权）人： | 广州金域检测科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京精金石专利代理事务所(普通合伙) 11470 | 代理人： | 刘晔 |
| 地址： | 510000 广东省广州市国际生物岛*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 同时 检测 mdr1 cyp19a1 基因 多态性 引物 及其 方法 | ||
1.一种同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增引物和 SNaPshotPCR引物；所述PCR扩增引物包括：针对MDR1_C3435T的上游引物5’- GATGGCAAAGAAATAAAGCGACTG-3’和下游引物5’-ACTCGATGAAGGCATGTATGTTG-3’，针对 CYP19A1_rs4646的上游引物5’-TCAAACTCTTGGCCTCTGCTTT-3’和下游引物5’- TGGCCCATGGCATTTTATAGG-3’；所述SNaPshotPCR引物包括：针对MDR1_C3435T的SNaPshot PCR引物5’-TTTTTTTTTTTTTTTGTTGGCCTCCTTTGCTGCCCTCAC-3’，针对CYP19A1_rs4646的 SNaPshotPCR引物5’-TTTTTTTTTTTTTTTTCTATGGGTTGTCACCAAGCTAGGTGCTATT-3’。
2.根据权利要求1所述的同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的引物，其特征在于：所 述PCR扩增引物中MDR1_C3435T和CYP19A1_rs4646的引物浓度比为1:1，所述SNaPshotPCR 引物中MDR1_C3435T和CYP19A1_rs4646的引物浓度比为1:1。
3.一种同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的方法，其特征在于：包括如下步骤：
S1提取DNA样品；
S2以步骤S1提取的DNA样本为模板，采用权利要求1中所述的PCR扩增引物进行多重PCR 扩增，并对扩增产物进行纯化；
S3以步骤S2纯化后的PCR扩增产物为模板，采用权利要求1中所述的SNaPshotPCR引物 进行SNaPshotPCR扩增，并对SNaPshotPCR扩增产物进行纯化；
S4采用毛细管电泳技术进行检测，对检测结果进行分析，确定SNP位点及其基因型。
4.根据权利要求3所述的同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的方法，其特征在于：所 述步骤S1中的DNA样品为EDTA抗凝外周血的DNA样品。
5.根据权利要求3所述的同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的方法，其特征在于：所 述步骤S2中的多重PCR扩增反应条件包括：阶段1：98℃3min；阶段2：98℃10s；阶段3：58℃ 30s；阶段4：72℃1min；阶段5：返回到阶段2，29个循环；阶段6：72℃5min；阶段7：25℃保 温。
6.根据权利要求3所述的同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的方法，其特征在于：所 述步骤S3中的SNaPshotPCR扩增反应条件包括：阶段1：96℃10s；阶段2：55℃5s；阶段3： 60℃30s；阶段4：返回到阶段1，25个循环；阶段5：4℃保温。
7.根据权利要求3所述的同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的方法，其特征在于：所 述步骤S4中采用GENEMAPPERIDV4.1软件对检测结果进行分析。
8.根据权利要求1所述的同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的引物在制备检测MDR1 和CYP19A1基因多态性试剂中的用途。
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