[发明专利]一种同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的引物与方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种同时检测MDR1和CYP19A1基因多态 性的与及其方法。

背景技术

多药耐药基因(MDR1)编码P-糖蛋白（P-gp），它是人体药物转运中最重要的转运 体，能主动将疏水性抗肿瘤药物泵出胞外，从而减少细胞内药物浓度。几乎所有的肿瘤，包 括各种实体瘤、白血病、淋巴瘤等均有MDR1表达。

现代研究发现，MDR1基因多态性直接影响P-gp的表达，与抗肿瘤药物与免疫抑制 剂等多种药物的代谢动力学有重要关联。rs1045642（C3435T）、rs1128503(C1236T)和 rs2032582(G2677T/A)是蛋白编码区最常见的SNP位点，与药物代谢密切相关。MDR1基因 3435CC/CT型使得MDR1表达增加，增大肿瘤细胞的耐药性，使蒽环类抗肿瘤药疗效不显著， 而TT型患者，能较好地吸收化疗药物，使药物在体内维持相对较高的血药浓度，对药物较为 敏感。MDR1基因G2677T/A多态性，与紫杉醇的疗效相关，2677GG基因型患者的总生存期差于 GA、GT、TT、TA基因型患者。

芳香化酶是细胞色素P450酶超家族成员，编码基因为CYP19A1，可催化睾酮、雄烯 二酮向雌酮、雌二醇转化，在雌激素生物合成中起最终的限速催化作用。芳香化酶抑制剂 （AIs）通过抑制芳香化酶，使雌激素水平下降，从而消除雌激素对肿瘤生长的刺激作用。绝 经后妇女的雌激素主要来源于雄激素前体物质在外周组织的芳香化，故该类药物主要用于 自然绝经或人工绝经后的乳腺癌患者。阿那曲唑、来曲唑（第三代非甾体类AIs）对芳香化酶 的抑制程度可达99％以上。

临床研究证实，CYP19A1基因多态性对芳香化酶抑制剂在乳腺癌的治疗效果有着 很大的影响作用。在接受来曲唑治疗的绝经后激素受体阳性转移性乳腺癌患者，携带 CYP19A1基因rs4646G＞T突变患者的的疾病进展时间比正常者明显延长。因此，CYP19A1 3’-UTRrs4646G＞T是乳腺癌患者接受芳香化酶抑制剂治疗疗效的有效预测指标。

因此，检测MDR1和CYP19A1基因的多态性，可以有效的预测绝经期晚期乳腺癌患者 接受芳香化酶抑制剂的治疗疗效；同时还可以预测多种抗肿瘤药物与免疫抑制剂疗效及不 良反应风险，具有重要的临床价值。

中国专利CN102816845B公开了一种MDR1的G2677T/A单核苷酸多态性检测试剂 盒，所述试剂盒包括红细胞裂解液、DNA提取液、PCR试剂、单链纯化试剂和测序试剂，可用 于检测MDR1（G2677T/A）位点是否发生突变。

中国专利CN101781684B公开了CYP19A1基因SNP检测液相芯片及检测方法，所述液 相芯片包括有针对CYP19A1基因的SNP位点分别设计的野生型和突变型特异性ASPE引物，每 种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端的针对目的基因SNP位点的特异性引物序列组成。该检 测方法检测特异性好，可以实现多个SNP位点的并行检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时检测MDR1和CYP19A1基因多态性的引物与方法， 该引物主要用于检测MDR1基因的MDR1_G2677T/A(SNP:rs2032582)、MDR1_C3435T(SNP: rs1045642)两个位点和CYP19A1基因c.*161T>G(SNP:rs4646)位点，具有特异性好、灵敏度 高、准确性好等优点，为MDR1和CYP19A1基因多态性提供了一种简单有效的检测方法。