[发明专利]一种检测结核感染的磁珠化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术，具体涉及生物医学检測技术，尤其涉及一种检测结核感染的磁珠化学发光试剂盒及其应用。

背景技术

结核病是全球三大传染性疾病之一，中国结核患者数量居全球第二位，全国结核感染率为44.5％，平均每年新发病例91.2万，死亡4.7万人。结核病给人们带来了很大的经济和社会负担。随着研究的不断深入，结核病的临床诊断方法取得了较大的发展，免疫学检测方法是现阶段检测结核分枝杆菌感染的重要辅助方法之一，其中以抗原特异性刺激后的γ干扰素释放实验(IGRA)为主。IGRA方法通常采用结核分枝杆菌特异性的RD(Region of Difference)区基因编码抗原，因而较好的避免已接种BCG(卡介苗)的干扰。然而，现有报道表明人群存在较严重的非结核分枝杆菌感染情况，现有商用试剂盒T-spot.TB和QuantiFERON(QFT)-IT在结核病诊断应用中的效果不甚理想，表现为其检测的敏感性均为80％左右。其中主要原因是检测方法分别是ELISPOT和ELISA法，方法的灵敏度均有限，在诊断的特异性和敏感性方面还存在一些不足，需要加以改进。现有研究表明，酶促化学发光法通过酶和发光底物的放大途径，可达到数十倍至数百 倍于ELISA法的灵敏度。目前尚未见有磁珠化学发光法检测结核感染试剂盒的报道，宜进一步研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，克服上述不足之处，研究设计利用化学发光与酶联免疫分析相结合，具有更高灵敏度的检测结核感染试剂盒。

本发明所述试剂盒

本发明提供了一种检测结核感染的磁珠化学发光试剂盒，所述试剂盒包括：链霉亲合素磁珠混悬液、γ干扰素校准品、植物凝集素(PHA)、结核杆菌特异性抗原多肽、无血清培养液(AIM-V)、生物素标记的抗人γ干扰素单抗、碱性磷酸酶标记的抗人γ干扰素单抗、发光底物液(APS 5)、校准品稀释液、抗体稀释液和洗涤液。

具体的，本发明所述试剂盒由下列组分各一份组成：

(1)链霉亲合素磁珠混悬液，10ml/支；

(2)γ干扰素校准品，1μg/瓶；

(3)PHA植物凝集素，10ml/瓶；

(4)结核杆菌特异性抗原多肽,10ml/瓶；

(5)无血清细胞培养液(AIM-V),10ml/瓶；

(6)生物素标记的抗人γ干扰素单抗，0.5ml/管；

(7)碱性磷酸酶标记的抗人γ干扰素单抗，0.5ml/管；

(8)发光底物液(APS 5)，25ml/瓶；

(9)校准品稀释液,10ml/瓶；

(10)抗体稀释液，10ml/瓶；

(11)洗涤液，20ml/瓶。

本发明试剂盒所述的链霉亲合素磁珠混悬液作为酶联免疫和固相分离载体，用于捕获抗原-抗体复合物；浓度为0.1mg/ml。

所述的γ干扰素校准品为白色冻干粉，浓度为1μg/ml。

所述的PHA植物凝集素作为阳性对照，浓度为100-200μg/ml。

所述的结核杆菌特异性抗原多肽，特异性刺激样本分泌γ干扰素，浓度为5-20μg/ml。

所述多肽是一种氨基酸聚合物

所述的无血清培养液(AIM-V)作为空白对照。

所述的二种抗人γ干扰素单抗分别为生物素标记单抗和碱性磷酸酶标记单抗，这两种单抗与抗原反应形成抗原-抗体复合物。

本发明试剂盒所述生物素标记的抗人γ干扰素单抗，稀释比为1:2000；碱性磷酸酶标记的抗人γ干扰素单抗,稀释比为1:200。

所述抗原可以天然分离得到，也可以通过克隆技术和基因工程的方法获得融合蛋白，此为行业内所熟悉的公知技术。

本发明试剂盒所述的发光底物液APS 5为碱性磷酸酶的化学发光底物。

所述标准品稀释液含1％牛血清白蛋白，0.01M PH7.4的磷酸盐缓冲液及0.02％Procline-300。

所述抗体稀释液含1％牛血清白蛋白，0.01M PH7.4的磷酸盐缓冲液,1M NaCl及0.02％Procline-300。

所述洗涤液为三羟甲基氨基甲烷洗涤液pH值为7.4,含0.8gNaCl,0.02gKCL,0.3g Tris碱及0.05％吐温-20。

本发明试剂盒使用不透明白色酶标板进行检测。

所述的不透明白色酶标板为96孔可拆卸或不可拆卸的不透明白色酶标板。