[发明专利]循环肿瘤细胞蛋白分型试剂盒

说明书

本发明涉及一种循环肿瘤细胞蛋白分型试剂盒，包括有：针对不同CTCs标志蛋白质的捕获抗体，所述CTCs标志蛋白质包括有上皮细胞标志蛋白质、间质细胞标志蛋白质；所述上皮细胞标志蛋白质选自：EPCAM、E‑cadherin、KRT5、KRT7、KRT8、KRT16、KRT17、KRT18、KRT19、KRT20；所述间质细胞标志蛋白质选自：N‑cadherin、vimentin、fibronectin、MMP2、MMP3、MMP9、AKT2、ZEB1、FOXC1、FOXC2、SNAI1、SNAI2、SERPINE1；还包括针对不同CTCs标志蛋白质的标记抗体，本发明标志蛋白质的选取，除了能实现单个标志蛋白质的检测外，还与其它标志蛋白质一起使用，从而能够最全面地检测出循环肿瘤细胞，并区分其细胞类型，解决了循环肿瘤细胞个体之间由于某些标志蛋白质表达水平的差异而造成假阴性结果。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种循环肿瘤细胞蛋白分型试剂盒。

背景技术

肿瘤细胞获得侵袭能力并发生远处转移是其导致患者死亡的主要原因。循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)于1869年首次被发现，它来源于原发肿瘤或转移肿瘤，获得脱离基底膜的能力并通过入侵组织基质进入血管，是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。目前的肿瘤转移理论认为，肿瘤细胞需要脱离原发灶，突破血管屏障并进入血液或淋巴循环才能在远处形成转移灶，所以CTC的形成可能是肿瘤转移的早期阶段。CTC是一群异质性细胞，根据标志蛋白的表达情况，主要将其分为上皮标志物阳性表型(简称上皮细胞型)、间质标志物阳性表型(简称间质细胞型)和上皮与间质混合表型(简称上皮-间质细胞型)等。目前以蛋白质检测为靶点的分型技术主要是基于抗原抗体特异性结合反应原理，主要检测标志蛋白包括：上皮细胞标志蛋白，如上皮细胞粘附分子(epithelial celladhesion molecule,EpCAM)、角蛋白(keratin,KRT)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)等；间质细胞标志蛋白，如N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和纤连蛋白(fibronectin)等。上皮-间质转换(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是肿瘤细胞发生转移的关键步骤，EMT过程中，多种转录因子会发生活化表达，包括ZEB1、ZEB2、snail等。EMT的发生使原发肿瘤细胞的细胞间粘附作用下降，细胞迁移和侵袭性增加，失去上皮标志物获得间质细胞表型并具有干细胞特性，已有研究表明，间质细胞型CTC具有最强的转移潜能。

目前对CTCs的分型方法主要依赖于对细胞核酸和蛋白质的检测，然而核酸检测特异性差，易污染，产生假阳性结果。以蛋白质为靶点的分型技术主要包括荧光原位杂交法、免疫染色法、流式细胞术以及通过美国FDA批准进行临床应用的CellSearch检测系统等。常规的免疫染色法一次只能检测一种抗原，操作程序复杂且有假阳性结果的存在；流式细胞术灵敏度低，且不能提供细胞形态学信息；而CellSearch检测系统以上皮细胞标志物为靶点，无法检测到丢失上皮抗原的CTC。目前使用较多的是荧光原位杂交技术，但由于该法存在非特异型性的抗原抗体反应且结果判定的客观性不足等缺陷而影响检测结果的准确性。因此，建立一种快速、精准的CTCs分型检测方法对癌症患者疾病的控制和治疗至关重要。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种特异性强、灵敏度高和精确度高的循环肿瘤细胞蛋白分型试剂盒。

实现上述目的的技术方案如下。

一种循环肿瘤细胞蛋白分型试剂盒，包括有：

(1)针对不同标志蛋白质的捕获抗体，所述捕获抗体连接标志蛋白质和标记抗体，能与标志蛋白质和标记抗体发生特异性结合反应，不同捕获抗体之间反应特性互不干扰；