[发明专利]分离自臭常山三氯甲烷提取物的化合物及其抗虫用途

权利要求书

1.如式(I)所示的化合物：

2.权利要求1所述的化合物与无机酸或有机酸形成的盐。

3.权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的盐在防治线虫中的用途。

4.权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的盐在制备抗线虫制品中的用途。

5.一种抗线虫制品，其特征在于，其抗虫活性成份包含权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的盐。

6.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)臭常山根的三氯甲烷萃取物的制备

将干燥的臭常山根剪碎后，依次用95％乙醇、75％乙醇、50％乙醇和蒸馏水分别浸泡3天，在50℃水浴锅中减压蒸发浓缩除去乙醇，得到的乙醇浸提物先在室温下用正己烷萃取，分层后，取水相，在室温下用三氯甲烷萃取，分层后，水相弃去，留三氯甲烷相在40-45℃水浴锅中进行减压蒸发浓缩，除去三氯甲烷，即得到臭常山根的三氯甲烷萃取物；

(2)萃取物的一级硅胶柱层析分离

确定起始洗脱剂：首先采用薄层层析确定起始洗脱剂，具体步骤为：取1μL步骤(1)获得的臭常山根的三氯甲烷萃取物，用丙酮稀释500倍，用毛细管点样于GF254薄层色谱板上，在层析缸中加入1mL比例配比为100：2～0：100的石油醚：乙酸乙酯洗脱剂；将点好样品的薄层板放入展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.3～0.5cm，盖上缸盖，待展开至距薄层板上沿0.5～1.0cm时，取出薄层板，用电吹风吹干溶剂，在紫外灯下观察展开情况，并将薄层板放入碘缸中显色，当最前沿斑点的Rf值在0.2～0.3时，即可确定此展开剂为起始洗脱剂，最后确定的起始洗脱剂的石油醚：乙酸乙酯配比是100：2；

装柱：采用湿法装柱，将85×550mm的玻璃色谱柱垂直固定在铁架台上，在柱的下端塞少许脱脂棉花，倒入一药匙石英砂，防止硅胶泄漏；将200～300目硅胶放入烧杯中，加入适当量的起始洗脱剂，经充分搅拌，将硅胶内的气泡除去后再加入柱内，一边沉降一边添加；硅胶加完后，仍使起始洗脱剂流一段时间，然后使色谱柱中高于硅胶面上的起始洗脱剂几乎全部流入接收瓶内；然后用橡皮塞在色谱柱外敲打，将硅胶柱内的气泡赶净；色谱柱装好后，使其静置过夜，以压实硅胶，提高分离效果；

加样：样品的加入，采用干法加样，所述样品为臭常山根的三氯甲烷萃取物，具体步骤为：待硅胶柱静置过夜后，先将色谱柱中硅胶面上的多余起始洗脱剂放出；用丙酮溶解样品，加入适当量的200-300目硅胶拌匀，用吹风机吹干溶剂成粉末状，用小勺将拌匀后的样品缓慢加入色谱柱中；样品加入后，用滴管吸取少量起始洗脱剂缓缓冲洗色谱柱壁，打开活塞将起始洗脱剂慢慢放出，待柱面上没有起始洗脱剂时，将一块脱脂棉平铺于柱面，压上玻璃棒，防止加入洗脱剂时破坏色谱柱面，加入洗脱剂后，开始分离；

洗脱：洗脱剂采用石油醚-乙酸乙酯-无水乙醇，按极性从小到大梯度洗脱，采用500-600mL等馏分收集法，使用旋转蒸发仪回收溶剂，在回收过程中将馏分经薄层层析检验后将成分相同或相似者合并；洗脱时先加起始洗脱剂，按从小到大增加石油醚-乙酸乙酯-无水乙醇洗脱剂的极性，每个洗脱剂梯度一般收集5-6个馏分；加到石油醚：乙酸乙酯：无水乙醇＝100:100:50后，当收集5-6个收集瓶后，洗脱剂不再倒回色谱柱内，待到柱内表面没有溶剂时，加入无水乙醇洗脱，收集5-6个收集瓶时，洗脱剂不再倒回色谱柱内，待到柱内表面没有溶剂时，加入水洗脱，洗脱下来的溶液用三氯甲烷萃取，萃取液经旋转蒸发仪回收试剂；臭常山根的三氯甲烷萃取物经一级柱层析分离，并通过薄层层析检测合并相同的组分，然后继续进行细分离；

(3)萃取物的二级硅胶柱层析分离

确定起始洗脱剂：采用薄层层析检验，确定各部分起始洗脱剂，方法同一级硅胶柱层析分离；

装柱：采用湿法装柱，玻璃色谱柱规格为25×400mm，30×400mm，40×400mm，其余同一级硅胶柱层析分离；

加样：样品的加入，采用干法加样，所述样品为臭常山根的三氯甲烷萃取物经一级柱层析分离后并通过薄层层析检测合并的相同组分，方法同一级硅胶柱层析分离；

洗脱：二级柱层析分离采用等梯度洗脱，按150mL等馏分收集法收集，使用旋转蒸发仪回收溶剂，经薄层层析检验后将成分相同或相似者合并；当活性成分成功洗脱后，洗脱液不再倒回色谱柱内，待到柱内表面没有溶剂时，加入无水乙醇洗脱，收集4-5个收集瓶后，洗脱液不再倒回色谱柱内，直到没有洗脱液可收集。