[发明专利]一种生物表面活性素的生产方法

权利要求书

1.一种生物表面活性素的生产方法，其特征在于，包括生物表面活性素的发酵制备与分离；其中发酵制备的过程为：先将保藏号为CGMCC No.6249的解淀粉芽孢杆菌fmb50接种于PDA斜面培养基进行培养，再取PDA斜面培养基培养后的菌种接种于BPY种子培养基继续培养，最后取BPY种子培养基培养后的菌种接种于发酵培养基培养后得到含有生物表面活性素的培养液；分离的过程为：将发酵培养基培养后得到的培养液加水使稀释因子为2.0-3.0，调pH至4.0-6.0，于30-50℃恒温保持10-60min，然后加入壳聚糖、海藻酸钠和硅藻土，搅拌混合后过滤并弃去原始滤液；然后再加水过滤至后续滤液透光率达到90％以上，停止过滤，将滤饼吹干；按照滤饼含水量加入低级醇，同时加入活性炭，将pH调至7 .0以上，使加入低级醇后过滤的滤液透光率为90％以上，然后将滤液减压蒸馏得到生物表面活性素粗品；其中低级醇加入体积的计算公式如下：

y＝(1.665e²-2.3305e+0.8388)x，上式中，y代表单位质量滤饼所需体积，单位为L/kg，e代表滤液低级醇体积分数，单位为％，x代表滤饼含水比例，单位为％；

所述发酵培养基的配方为黄豆粉50-100g/L、麦芽糊精10-30g/L、K₂HPO₄·3H₂O 9g/L、MgSO₄·7H₂O 0.6g/L、CaCl₂ 0.1g/L、FeSO₄·7H₂O 0.01g/L、MnSO₄·H₂O 0.05g/L、尿素1g/L、乳化硅油0.5mL/L、pH7.0，其中麦芽糊精单独灭菌后加入。

2.根据权利要求1所述的生物表面活性素的生产方法，其特征在于，所述发酵制备的过程中，解淀粉芽孢杆菌fmb50于PDA斜面培养基进行培养的温度为37℃，培养时间12-24h。

3.根据权利要求1所述的生物表面活性素的生产方法，其特征在于，所述发酵制备的过程中，解淀粉芽孢杆菌fmb50于BPY种子培养基培养的条件为37℃，180rpm培养10-18h。

4.根据权利要求1所述的生物表面活性素的生产方法，其特征在于，所述PDA斜面培养基的配方为马铃薯150～200g/L、葡萄糖20g/L、琼脂粉15-20g/L。

5.根据权利要求1所述的生物表面活性素的生产方法，其特征在于，所述BPY种子培养基的配方为牛肉膏5g/L、酵母膏5g/L、NaCl 5g/L、蛋白胨10g/L、葡萄糖10g/L、pH 7.0。

6.根据权利要求1所述的生物表面活性素的生产方法，其特征在于，发酵培养基的培养过程为：发酵培养温度为33℃，菌种接种后维持DO>20％培养至发酵液中还原糖含量降低至5g/L，然后加入麦芽糊精4-8g/L；之后发酵培养至DO<5％且通过提高转速无法控制DO>5％时，加入尿素1g/L，维持空气通量0.7-1VVM，并维持DO<5％，继续发酵；发酵全程中维持pH6.5以上，当继续发酵培养至pH>7.5、DO>5％或培养时间超过40h即可放罐。

7.根据权利要求1所述的生物表面活性素的生产方法，其特征在于，分离的过程中加入的低级醇为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇中的一种。

8.根据权利要求1所述的生物表面活性素的生产方法，其特征在于，分离的过程中加入壳聚糖的质量浓度为20-80mg/L，加入海藻酸钠的质量浓度为30-50mg/L，加入硅藻土的质量体积百分比为1-3％，加入活性炭的质量浓度为4-10g/L。

9.根据权利要求1所述的生物表面活性素的生产方法，其特征在于，分离的过程中所述的过滤为使用板框压滤。