[发明专利]一种米曲霉发酵酶液的提取物及其应用

权利要求书

1.一种米曲霉发酵酶液的提取物在降解植物纤维素中的应用，其特征在于，所述提取物是由米曲霉HML366通过下述步骤制备得到：

（1）将米曲霉HML366的 PDA斜面菌种制成孢子液，取孢子液中孢子于纤维素酶复筛固体培养基中，30℃恒温培养5-8天；所述纤维素酶复筛固体培养基为：12 g蔗渣，8 g麸皮，60mL Mandels 营养盐液；

（2）在步骤（1）所得培养物中加入150-250mL无菌重蒸水，40℃恒温水浴1-2小时，然后浸提、过滤并离心得到粗酶液；

（3）收集步骤（2）所得粗酶液中的上清酶液，使用3000Da纤维素超滤柱将所述上清酶液浓缩，浓缩至原来上清酶液1/5体积，再使用阴离子交换层析分离纯化，压力为580 psi，以pH 8.3的0.01 mol/L Tris-HCl为起始缓冲液，在所述起始缓冲液中添加 1 mol/L的NaCl为洗脱缓冲液，纯化至 NaCl 摩尔浓度为0.27 mol/L时，得到成品；所述浓缩、纯化均在2~4℃进行；

所述提取物具有如Seq ID No .1所示的氨基酸序列;

所述提取物的149个氨基酸残基具有葡聚糖外切酶CBH1活性，385个氨基酸残基具有葡聚糖内切酶活性。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（1）中，所取孢子液中孢子的个数为10⁵-10⁸个。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（2）所述离心的转速为4500-5500r/min，时间为10-30min。