[发明专利]人工栽培桑黄提取物抗炎活性成分制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及人工栽培桑黄提取物抗炎活性成分制备方法。

背景技术

桑黄作为我国传统的中药材，最早记载于《神农百草经》和李时珍的《本草纲目》，主要用于止泻、崩漏带下、脾虚泄泻，此外还能利五脏、排毒、活血。在20世纪70年代就已经认识到桑黄的抗肿瘤效果(SasakiT，AraiY，IkekawaT，etal.Antitumorpolysaccharidesfromsomepolyporaceae，Ganodermaapplanatum(Pers.)PatandPhellinuslinteus(Berk.etCurt)Aoshima[J].ChemPharmBull(Tokyo)，1971，19(4):821)。在过去的30年里，其20多种药效逐渐为人们所探知，如增强机体免疫、保肝护肝、治疗关节炎等(张维博，王家国，李正阔，杨丽群，秦俭，向仲怀，崔红娟.药用真菌桑黄的研究进展，中国中药杂志，2014；39(15)：2838-2845)；桑黄的乙醇提取物已被证实具有消炎和止痛功效(KimSH，SongYS，KimSK，etal.Anti-inflammatoryandrelatedpharmacologicalactivitiesofthen-BuOHsubfractionofmushroomPhellinuslinteus[J].JEthnopharmacol，2004，93(1):141)；该提取物还可以降低CD3+(Tcells)，CD19+(Bcells)，CD4+(T-helper)，CD8+(T-cytotoxic)，MHCclassⅡ/CD11c+(antigen-presentingcells)，CD4+/CD25+(activatedT-helper)等免疫相关蛋白的表达，抑制白细胞向红肿部位的募集，同时减少TNF-α，IL-1β和IL-6细胞因子以及免疫球蛋白IgG的释放，从而缓解小鼠的关节炎(KimGY，RohSI，ParkSK，etal.AlleviationofexperimentalsepticshockinmicebyacidicpolysaccharideisolatedfromthemedicinalmushroomPhellinuslinteus[J].BiolPharmBull，2003，26(4):1418)。

由于野生桑黄生长缓慢，产量十分稀少。本发明申请人前期开展了大量的桑黄子实体人工袋料栽培技术研究，并对相关技术申请了“一种具有抗肿瘤活性的桑黄高效工厂化袋料栽培工艺(申请号：201511009405.2)”，现在需要一种提取该桑黄抗炎活性成分的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供人工栽培桑黄提取物抗炎活性成分制备方法，能够有效解决目前没有提取桑黄抗炎活性成分方法的问题。

为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：人工栽培桑黄提取物抗炎活性成分制备方法，由2015年10月23日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所邮编100101，保藏编号为CGMCCNo.11407的桑黄菌培育成对桑黄子，依次包括以下步骤：

A、取人工栽培的桑黄子实体经50-70℃干燥，粉碎后过40-60目筛，以20-30倍量水90-95℃浸提18-24h，重复上述浸提3次，冷却，过滤，合并滤液，减压浓缩得水提取物；

B、取水提取物加3倍体积100％乙醇沉淀18-24h，离心去沉淀，收集上清液减压浓缩得水提取物，重复上述沉淀步骤1次，获得的水提取物冷冻干燥得干粉；

C、干粉用100％甲醇溶剂萃取，去除甲醇溶剂得到甲醇不溶解沉淀，沉淀物冷冻低压干燥去除甲醇残留，即得目的提取物。

与现有技术相比，本发明的优点是：

1、本发明工艺简单，操作合理，同时可以得到桑黄水提取物抗炎有效部位，该有效部位与已报道的桑黄抗炎有效部位(乙醇提取物)不同，是桑黄这种中药材在抗炎作用中的新发现；

2、以本发明所述的桑黄提取物1克/千克体重剂量给小鼠灌胃后，连续观察14d，小鼠全部健存，其外观、食欲、行为活动、排泄等均未见异常；第14d脱颈处死并解剖，各个脏器官未见异常，说明桑黄提取物在该剂量及以下剂量下研究其抗炎性较安全；

3、本发明研究结果为桑黄在结肠炎、细菌引起的感冒发烧炎症治疗的临床用药方面，提供了理论与实验基础；