[发明专利]脂蛋白a(Lp(a))测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明是属于医学免疫领域，涉及一种免疫检测试剂，进一步说，本发明涉及脂蛋 白a(Lp(a))测定试剂盒检测试剂盒。

背景技术

脂蛋白a测定试剂盒，该产品用于体外定量测定人血清中脂蛋白(a)（Lp(a)）含量， 作辅助诊断用。脂蛋白(a)是一种独特的脂蛋白，脂质组成结构与LDL极其相似，因含有特殊 的载脂蛋白(a)而得名。1987年发现脂蛋白(a)的一级结构与纤溶酶原具有显著同源性，其 增高有导致血栓形成的倾向。Lp(a)体内水平高低与血脂、载脂蛋白不相关，是动脉粥样硬 化性心脑疾病的重要的独立危险因素。对冠心病、急性心梗的发病、病程变化以及转归极具 诊断价值。

诊断方法：Lp(a)的测定一般采用RIA法、ELISA法与CLlA法、乳胶免疫比浊法等，但 在临床上多采用乳胶免疫比浊法

血清（含Lp(a)）+试剂（乳胶抗人Lp(a)抗体）━━━━抗原抗体复合物

产生浊度变化,在一定的波长下检测,其浊度的变化与其含量成正相关。

目前抗体与乳胶的连接通常使用化学偶联法，其作为R2试剂，非常容易发生聚结， 使得试剂质量随着存放时间的延长而下降。使试剂的稳定性差。

发明内容

本发明根据R2试剂稳定性不佳，提供了一种方法来克服现有技术的不足，使得其 保持质量稳定，提供了一种灵敏度高，稳定性好的脂蛋白a(Lp(a))检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种脂蛋白a(Lp(a))测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1、试剂R2，所述的试剂R1为 适当的缓冲液；

所述的试剂R2是用Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒置于缓冲液中，所述试剂R2的制 备步骤包括：

步骤(1)：在带有羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒(胶乳)中加入乙基二甲基胺丙基碳化二亚 胺(EDAC)，得到激活的胶乳颗粒；

步骤(2)：将步骤(1)激活的胶乳颗粒和Lp(a)抗体混合，待反应结束后再加入葡萄糖封 闭胶乳微球上未反应的基团，得到偶联抗体的胶乳微球即Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗 粒，置于缓冲液中。

作为进一步优选：步骤(2)中Lp(a)抗体致敏聚苯乙烯胶乳颗粒在试剂R2中的浓度 为0.08～0.28克/100ml。

作为进一步优选：所述试剂R1中的缓冲液为PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓 冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES) 缓冲液缓冲液中至少一种。

作为进一步优选：所述试剂R2中的缓冲液为PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓 冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液、2-吗啉乙磺酸(MES) 缓冲液缓冲液中至少一种。

作为进一步优选：步骤(1)中乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺∶聚苯乙烯胶乳颗粒的 重量比为0.2～5∶100。

作为进一步优选：所述Lp(a)抗体包括多克隆抗体或单克隆抗体。

作为进一步优选：所述步骤（1）中的聚苯乙烯胶乳颗粒其平均粒径在0.01~0.2mm 之间。

本发明所述试剂盒所采用的检测原理为胶乳增强免疫透射比浊法，其原理是Lp (a)抗体的胶乳颗粒，与Lp(a)发生免疫反应后，形成聚集颗粒，在一定波长下，通过测定聚 集物形成所产生的浊度，即可测出Lp(a)的含量。

本发明的优点和有益效果：

1.本发明的试剂盒具有检测简单而快速、灵敏度高、准确性好、抗干扰能力强及生产成 本低的优点。

2.本发明采用的Lp(a)检测方法为胶乳增强免疫比浊法，该方法使得Lp(a)的检测 更为经济、方便和快速，适用于绝大多数医院的自动生化分析仪，特别是对急诊能实现快速 定量检测。

具体实施方式

下面通过实施例进一步详细描述本发明，但本发明不仅仅局限于以下实施例。

实施例1：Lp(a)检测试剂盒的制备

本发明的试剂盒涉及试剂的主要原材料如下：

1.Lp(a)抗体：单克隆抗体(市售)。

2.胶乳：本发明仅示例性的采用直径为80～200nm带羧基基团的聚苯乙烯胶乳颗 粒(市售)进行实验。