[发明专利]一种转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子及其制备和应用方法

权利要求书

1.一种转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子制备方法，其特征在于，包括 以下步骤：

步骤一：将黑曲霉接种于斜面固体培养基活化；

步骤二：活化后的黑曲霉接种于液体培养基培养后收集黑曲霉孢子；

步骤三：将收集的黑曲霉孢子进行水洗、冻融和加入萜类试剂处理，获得 能够进行生物转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子。

2.根据权利要求1所述的转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子制备方法， 其特征在于，所述步骤二：用含有0.05％～0.5％(V/V)Tween-80或Tween-20 的灭菌去离子水冲洗培养黑曲霉7-10日的斜面后，调取10⁸～10⁹spores/mL的 黑曲霉孢子悬液，将其接种于荞麦种子培养基，接种量为10⁸～10⁹spores/100g 荞麦种子，培养168～240h。

3.根据权利要求2所述的转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子制备方法， 其特征在于，所述的荞麦种子培养基的制备方法如下：荞麦种子300g用去离子 水洗净，用等量的去离子水煮熟，100℃沸水浴15～20min软化组织；倒掉多余 的水分，分装于锥形瓶中，高压蒸汽灭菌处理，通过该方法处理所获得的荞麦 种子培养基为：100g荞麦种子含水50g。

4.根据权利要求1所述的转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子制备方法， 其特征在于，所述步骤二：将含有0.05％～0.5％(V/V)Tween-80或Tween-20 的灭菌去离子水加入培养后的黑曲霉的荞麦种子培养基中，100～500rmp振摇 1～5h后，无菌条件下，用灭菌薄纱布过滤，收集滤液，5,000～20,000g离 心10～20min，弃掉上清液，收集下部黑曲霉孢子沉淀。

5.根据权利要求1所述的转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子制备方法， 其特征在于，所述步骤三水洗过程是将含有0.05％～0.5％(V/V)Tween-80或 Tween-20的灭菌去离子水于收集的黑曲霉孢子中，在5,000～20,000g，4℃ 下离心10～30min，弃掉上清液，收集下部沉淀，重复水洗步骤n次后，1≤n≤25， 收集孢子待用。

6.根据权利要求1所述的转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子制备方法， 其特征在于，所述步骤三将水洗后获得的黑曲霉孢子沉淀置入-20℃冰箱、-80℃ 低温冰箱或液氮罐中保持48h以上，然后从冰箱中取出，置于室温条件下，让 其迅速溶解。

7.根据权利要求1所述的转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子制备方法， 其特征在于，所述步骤三加入1-10wt％萜类化合物处理3-18h，收集孢子待用。

8.根据权利要求7所述的转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子制备方法， 其特征在于，所述的萜类化合物为单萜或类单萜化合物，包括：柠檬醛、柠檬 烯、萜品醇、月桂烯、芳樟醇、苔黑酚、松油醇、香芹醇中的一种或几种。

9.一种转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子，其特征在于，是由权利要求 1-8任一项所述的方法制备而成的。

10.权利要求9所述的转化葡萄糖产葡萄糖酸的黑曲霉孢子的应用方法， 其特征在于，将所述的黑曲霉孢子葡萄糖溶液加入带搅拌设备的反应容器中使 得黑曲霉孢子终浓度为10⁸～10¹⁰spores/mL，和葡萄糖溶液终浓度为20～60g/L， 反应器的底部以0.05～0.5L/min连续通风，且装有KOH溶液的柱子吸收CO₂， 25～35℃下转化168～240h。