[发明专利]一种高油酸油菜品种的培育方法

说明书

技术领域

本发明属于油菜育种技术领域，具体涉及一种高油酸油菜品种的培育方法。本发明涉及 利用小孢子培养、分子标记辅助选择和气相色谱法相结合选育优良高油酸油菜品系的方法。

背景技术

油菜种子中脂肪酸组成直接决定菜籽油的食用品质和营养价值。油酸是一种十八碳单不 饱和脂肪酸。普通油菜种子中油酸含量为17-65％，本发明中的高油酸油菜是指种子及菜籽油 脂肪酸中油酸的比例大于75％的油菜品种及其衍生的菜籽油。

高油酸食用油，包括高油酸菜籽油，在食用油和工业上有很高的应用价值。高油酸食用 油的氧化稳定性高，在煎炸食物时，高油酸食用油高温不起烟，能够缩短煎炸时间，减少油 吸收过量(Miller等,Geneticcontrolofhigholeicacidcontentinsunfloweroil.Crop Sciences,1987,27:923-926)。在日常饮食中，高油酸可降低血液中的低密度脂蛋白胆固醇 的含量，从而有利于阻止动脉血管硬化(Chang等,Effectsoftheratioofpolyunsaturatedand monounsaturatedfattyacidonratplasmaandliverlipidconcentration.Lipids,1998,33:481- 487)。由于油酸的十八碳链长度与柴油组分相似，高油酸菜籽油可用于生产优质生物柴油， 是重要的可再生性能源原料(Piazza等，Rapeseedoilforoleochemicaluses.EurJLipidSci Technol,2001,103:405-454)。

培育高油酸油菜是国内外油菜育种的主要目标之一。目前在中国还没有高油酸油菜品种 通过审定。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种油菜高油酸品种的培育方法，该方法利 用普通油酸含量(小于69％)的油菜品系或品种与高油酸(种子中油酸含量大于75％)油菜 材料为亲本进行杂交，利用气相色谱分析和小孢子培养的辅助方法，通过杂交在上述材料的 杂交后代中培育出高油酸油菜选系，即获得油酸含量大于78％的非转基因高油酸油菜材料和 品种。

本发明的技术方案如下所述：

(1)以甘蓝型油菜品系甲A177为母本(2012年测定油酸含量65％)【该材料的种子已于 2009年11月20日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCC NO：P200908；该生物材料已在专利号为ZL2009102734352，申请公布号为CN101824472A， 即本申请人的专利文献中公开，本申请不需要重新提交生物材料保藏与公开】与高油酸含量 甘蓝型油菜新资源甲H003为父本(2012年测定的油酸含量为80％。申请人将所述的父本命名 为油菜高油酸种子甲H003，BrassicanapusL.甲H003,于2016年1月25日送交中国.武汉.武 汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCCNOP201604)杂交，通过人工去 雄，得到F1；

(2)种植上步所得的F1，取花蕾进行小孢子培养(小孢子培养培养方法参见：余凤群 等，提高甘蓝型油菜小孢子胚状体成苗率的某些培养因素研究，作物学报，1997，23(2)： 165-168)获得分离的双单倍体(简称DH系)群体；

(3)利用高油酸分子标记(例如YQ-Fad2a-1)对DH系群体的每一个株系的幼苗进行 标记分析，可以在苗期获得每个株系的油酸基因型(该分子标记的制备及其应用方法参见申 请人，专利号为ZL2009102734352文献，申请公布号CN101824472A；申请公布日： 2010.09.08)，通过分子标记分析可以减少花期及后续种子分析的工作量，提高鉴定的准确性；

所用的分子标记引物(YQ-Fad2a-1，本发明中所称的分子标记和分子标记引物为同一 对序列)如下：

正向引物5'-CAGTTCACTCTCGGCAGC-3'，

反向引物5'-GCAACTCCTTGGACAGCA-3'；

(4)利用气相色谱仪测定每个株系种子的油酸含量(测定方法参照：杨燕宇等.无芥酸 甘蓝型油菜十八碳不饱和脂肪酸含量的QTL定位.作物学报，(2011).37(8):1342-1350)，确 认每个初选系的油酸含量；