[发明专利]杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法

权利要求书

1.一种杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法，其特征在 于：包括以下步骤：

(1)人工授粉：以杂交兰‘台北小姐’为母本，西藏虎头兰为父本进 行杂交，取母本开花后2～4d的花朵，用消毒过的镊子去除唇瓣及柱头上的 花粉块，取父本完全张开的花朵的花粉块置放于母本柱头蕊腔内；剪取授粉 205d后未开裂的成熟蒴果进行无菌播种；

(2)果荚预处理与种子播种：

将成熟蒴果进行预处理，然后将成熟蒴果的种子播种于萌发培养基中； 所述萌发培养基为1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g/L+活性炭 1.0g/L+琼脂5.8g/L；

(3)种子萌发：将种子接种于所述萌发培养基中培养，培养温度为25 ±2℃，光照强度1200Lux±100，光照时间12h/d；

(4)根状茎的增殖与分化培养：选择生长状态相近的种子萌发形成的根 状茎，在无菌条件下分切成长0.6～0.8cm的切段，接种于1/2MS+6-BA 2.0mg/L+NAA1.0mg/L+香蕉泥80g/L+蔗糖20g/L+活性炭1.5g/L+琼脂5.8g/L 的增殖与分化培养基中培养，培养温度25±2℃，光照强度1500Lux±100， 光照时间12h/d；

(5)壮苗生根培养：将根状茎分化形成的2.5～3.5cm的幼苗小心切下， 分选后剪除老根，仅留1～2条短嫩新根，接种于MS+6-BA1.0mg/L+NAA 2.0mg/L+蔗糖25g/L+香蕉泥100g/L+活性炭2.5g/L+琼脂5.8g/L的生根壮苗培 养基中培养，培养温度25±2℃，光照强度1500Lux±100，光照时间12h/d；

(6)炼苗移栽：待生根苗长至6.0～7.0cm、叶片3～4片、根3～4条 时，将瓶苗从培养室移至温室大棚，进行炼苗，继续生长30d，温室大棚遮 光率60％，温度保持25±2℃，空气湿度保持60％～70％；

出瓶种植前3～5d，打开瓶盖，然后取出小苗，洗净根部培养基，用 50％多菌灵可湿性粉剂1000倍稀释溶液浸泡3min，阴凉处自然晾干后种植 于发酵过的基质中，用恶霉灵溶液喷灌植株及植料；2d后浇透水，以后按 预定周期进行叶面喷水和喷洒0.1％多菌灵杀菌剂。

2.如权利要求1所述的杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方 法，其特征在于：所述步骤(2)中，将成熟蒴果进行预处理的具体方法如下：

将成熟蒴果置于流水下冲洗3min，用牙刷沾洗洁精仔细刷洗表皮，用手 术刀剔除柱头、残留的枯瓣及表皮病虫斑，再用75％酒精擦拭；放入1％NaClO 溶液浸泡15min，再用超声波清洗器震荡5～10min，移到超静工作台上，用消 毒过的镊子取出蒴果，用无菌水清洗2次；夹取蒴果沾上75％酒精后在酒精灯 上点燃消毒10s。

3.如权利要求1所述的杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方 法，其特征在于：所述步骤(2)中，将成熟蒴果的种子播种于萌发培养基中 的具体操作方法如下：

用手指捏住成熟蒴果的果柄，使蒴果朝风口而手在后，另一手持消毒过 的手术刀将果荚平切打开果皮，露出种子，用镊子直接夹取种子均匀撒播于 萌发培养基表面；或将消毒过的种子移入有无菌水的培养瓶中摇匀，然后用 无菌吸管吸取1ml摇匀悬浮液均匀滴到萌发培养基面上。

4.如权利要求1所述的杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方 法，其特征在于：所述基质包括质量比为2：1的树皮和碎石子。