[发明专利]水貂γ-干扰素单克隆抗体及其在检测水貂γ-干扰素中的应用

说明书

本发明公开了一种水貂γ‑干扰素单克隆抗体及其在检测水貂γ‑干扰素中的应用。在本发明中，所述的水貂γ‑干扰素单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.10953的杂交瘤细胞株分泌产生，研究表明由该杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体能够同时识别原核表达产物和真核表达产物，且与天然IFN‑γ的结合效价高，特异性好。此外，本发明还公开了一种以筛选的特异性单抗为包被抗体，多抗为检测抗体建立的夹心ELISA检测方法，实验证明该方法灵敏度、准确率高，特异性良好。因此，本发明的提出对于对水貂病毒感染及疫苗免疫后机体细胞免疫水平的评价以及特种动物的疫病防控具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种水貂γ-干扰素单克隆抗体的制备，还涉及一种检测水貂γ-干扰素的ELISA检测方法。本发明属于生物技术领域。

背景技术

大多数细胞因子是免疫应答的产物，在动物和人体内可发挥免疫学效应，最终通过上调免疫细胞对抗原物质的免疫应答，介导炎症反应而清除抗原物质。抗原刺激和病原微生物感染均可诱导体内产生细胞因子，因此细胞因子与疾病的发生、发展有着密切的关系，它们可参与疾病的发生、发展。因此细胞因子在疾病的诊断、治疗、预防等方面有着广泛的应用。

细胞因子可以导致和/或促进某些疾病的发生，病原微生物感染可诱导某些细胞因子过量产生，高浓度细胞因子可加剧感染症状，因此临床上通过检测一些细胞因子可以对疾病进行诊断。近年来，动物细胞因子的研究也越来越受到重视，采用基因工程技术开发出一些重组细胞因子产品(如干扰素)。其主要应用表现在：通过检测细胞因子水平来评价动物机体的免疫功能状态，其次也可以研究细胞因子在病原微生物感染，特别是一些持续性感染疾病、免疫抑制性疾病中的作用和地位。

干扰素(interferon，IFN)是1957年最早发现的细胞因子，因其能干扰病毒感染而得名。干扰素(IFN)等细胞因子可诱导APC表达MHCⅡ类分子，从而促进抗原递呈作用。30年前，IFN-γ最早被发现，于1982年被克隆。其仅由NK细胞、CD8+T细胞和CD4+T细胞Th1亚群产生，通过广泛表达的特异性受体(除了红细胞上不表达)发挥作用，血小板上也表达IFN-γ受体，为IFN-γ在血循环中的运输增加了可能性。

Th1细胞分泌IL-2，IFN-γ及淋巴毒素，Th1细胞功能与细胞介导的免疫应答(炎症反应，迟发型超敏反应及细胞毒作用)相关。与TDTH细胞、TC细胞增殖、分化、成熟有关，因此Th1细胞可促进细胞介导的免疫应答，其中IFN-γ是细胞免疫状态监测的重要指标。因此，检测IFN-γ转录因子水平，可以间接地反映出IFN-γ基因表达水平，从而为研究Th1细胞分化及其在自身免疫性疾病，病毒感染中的作用有着重要的临床和科研意义。

对样本中的IFN-γ进行定量分析，在免疫机制研究、免疫功能分析、疫苗免疫效果评估、器官移植、过敏反应以及多种胞内病原感染的诊断等方面都具有极其重要的理论价值和应用价值。评价IFN-γ在机体内的动态变化水平指标，对于了解传染性疾病的发生、发展、转归情况及其机体保护性免疫反应动态规律提供较大帮助。因此，建立评价IFN-γ在机体中水平变化的检测方法显得十分重要。

近年来，我国水貂、狐狸和貉对犬瘟热，细小病毒和阿留申病毒混合感染趋势上升，而传统疫苗免疫后保护率下降时有发生，这些是什么原因导致的，除了病毒的不断变异外，了解动物机体的免疫状态，也为免疫程序的优化及免疫时间的选择提供依据。因此，本发明的提出为开发具有自主知识产权的新型检测方法对于我国特种动物疫病防控具有深刻的现实意义与广阔的应用前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗水貂γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，同时建立水貂γ-干扰素的检测方法，从而为水貂γ-干扰素的检测提供一种新的技术手段，也为研究机体的免疫状态及免疫机制提供技术平台。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：