[发明专利]苹果渣和棉粕混合发酵生产蛋白饲料的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物饲料发酵领域，具体涉及一种粪肠球菌菌液制备及其发酵苹果渣 和棉粕生产蛋白饲料的方法。

背景技术

我国是世界水果生产大国，总产量位居世界首位。1998年生产量达5452.9万吨，其 中苹果1948.1万吨，位居世界第一位，加工能力只有5%左右。我国山东、河北、山西、陕西等 省为苹果渣的主产区。2006年，我国苹果种植面积190万公顷，产量2600万吨，产世界产量的 35%以上。

水果产业的迅速发展，加工产品种类繁多，加工能力不断提高，与此同时，苹果渣 的排出量也日趋增加。据统计，2007年底，山西省苹果贮藏能力约为186万吨，大型浓缩苹果 汁加工企业达12家，年加工能力22.6万吨。但是苹果渣的加工利用，并未收到重视，不仅对 环境造成污染，而且还造成资源的浪费。苹果渣是高含水量物质，含有部分可溶性糖、维生 素、矿物质及纤维素，具有丰富的营养物质，而大部分果品加工厂将果渣作为废弃物处理， 造成资源的极大浪费，也严重影响环境。苹果渣中含有单宁、果胶等抗营养因子，限制了苹 果渣的使用。

我国是产棉大国，棉籽饼粕产量大，每年产量约300万吨，是丰富的蛋白质来源。脱 壳程度较高的棉粕粗蛋白可达到50%以上，普通棉花的棉籽含有带毒性的棉酚及其衍生物， 俗称棉毒素，对单胃动物有害，而传统脱毒方法效率低，成本高，严重影响了棉粕在单胃动 物饲料中的应用。

发明内容

本发明的目的在于经微生物的发酵，降解苹果渣和棉粕中的抗营养因子，同时提 高饲料中蛋白质和小肽含量，生产一种蛋白饲料。

本发明是采用如下技术方案实现的：

一种苹果渣和棉粕混合发酵生产蛋白饲料的方法，包括以下步骤：

、粪肠球菌R-F菌液中的制备

（1）、菌种的活化：将斜面保存的粪肠球菌R-F在活化培养基上活化3次，挑取MRS平板上 透明圈较大的单菌落，接入深层MRS液体试管，30-35℃培养12-16h后，以1%接种量接入MRS 液体培养基，培养18-24h作为种子液；

（2）、摇瓶种子培养：

一级摇瓶种子培养：将活化好的粪肠球菌R-F按照5-10%的接种量接入一级摇瓶培养基 中，30-35℃静置培养12-16h，作为一级摇瓶种子液；

二级摇瓶种子培养：将一级摇瓶种子液按照5-10%的接种量接入到二级摇瓶培养基中， 在30-35℃培养箱中静置培养16-20h，作为二级摇瓶种子液；

（3）、种子罐培养：

一级种子罐培养：按照2-5%接种量将二级摇瓶种子液接到一级种子罐培养基中，培养 温度30-35℃，罐压0.03-0.05MPa，搅拌100-200转/分条件下培养12-18h，待总菌数达到1-3 ×10⁹CFU/ml以上时，转入二级种子罐培养基中培养；

二级种子罐培养：按照5-8%接种量将一级种子罐种子液接到二级种子罐培养基中，培 养温度30-35℃，罐压0.03-0.05MPa，搅拌100-200转/分条件下培养14-20h，待总菌数达到 4-7×10⁹CFU/ml以上时，转入发酵罐进行培养；

（4）、发酵罐培养：

按照5-10%的接种量将二级种子罐种子液转入发酵罐的发酵基础培养基，在温度30-35 ℃，搅拌100-120转/分钟，罐压0.03-0.05MPa条件下进行发酵，发酵过程中，调节pH在6.0- 6.5，培养时间为22-24小时；

其中，粪肠球菌R-F菌液制备步骤（1）中，活化培养基的成分包括：蛋白胨5-15g/L，牛肉 膏5-15g/L,酵母浸粉3-10g/L，葡萄糖10-25g/L，柠檬酸二铵1-4g/L，乙酸钠2-7g/L，磷酸氢 二钾1-5g/L，七水硫酸镁0.25-0.65g/L，一水硫酸锰0.1-0.3g/L，pH6.0-6.5。