[发明专利]一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒，其特征在于， 包括70R-17194抗体包被微孔板、10R-1128抗体酶结合物、缓冲液、底物工 作液、发光底物、洗涤液、质控品；其中70R-17194抗体和10R-1128抗体为 购自Fitzgerald的脑型脂肪酸结合蛋白抗体。

2.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述质控品为市售脑型脂肪酸结合蛋白标准品。

3.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述10R-1128抗体酶结合物为10R-1128抗体碱性磷酸酶结合 物。

4.如权利要求3所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述发光底物为CSPD。

5.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述微孔板为24孔、48孔或96孔微孔板。

6.如权利要求5所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述微孔板为96孔微孔板。

7.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述缓冲液由以下方法制备而得：向浓度为0.01mol/L、pH＝8.5 的Tris-HCl缓冲液中加入BSA和NaN₃，混合均匀，即得所述的缓冲液；其 中缓冲液中BSA的质量百分比浓度为1％；NaN₃的质量百分比浓度为0.02％。

8.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述底物工作液由以下方法制备而得：取400～700μl二乙醇胺、 100μl浓度为1mol/L的NaOH溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl₂溶液、 100μl质量百分比浓度为10％的NaN₃溶液，混匀，灭菌，制得底物缓冲液； 取800μl底物缓冲液，然后向底物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50 μl发光底物，混匀，灭菌，即得底物工作液。

9.如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒， 其特征在于，所述洗涤液由以下方法制备而得：在浓度为0.01mol/L、pH值 为7.4的PBS缓冲液中加入吐温20和NaN₃，混合均匀，即得所述的洗涤液； 其中洗涤液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％，NaN₃的质量百分比浓度为 0.2％。

10.一种如权利要求1所述的化学发光免疫检测脑型脂肪酸结合蛋白用 试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

1)制备70R-17194抗体包被微孔板：

A：取浓度为0.05mol/L、pH值为8.5的碳酸盐缓冲液，向其中加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为0.02％，制得包被缓冲液；将70R-17194抗体用 包被缓冲液稀释至0.05～0.3㎎/μl，制得70R-17194抗体包被液；

B：取步骤A制备的70R-17194抗体包被液加入到微孔板中，37℃包被2 小时，弃去孔内液体，4℃过夜后用生理盐水冲洗微孔板，然后向微孔板中加 入封闭液，37℃封闭2小时，弃去孔内液体，然后用生理盐水冲洗微孔板， 冷冻干燥，即得70R-17194抗体包被板，密封4℃保存备用；其中封闭液的制 备方法为：向浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA和NaN₃， 制得封闭液；封闭液中BSA的质量百分比浓度为1％，NaN₃的质量百分比浓 度为0.02％；

2)制备10R-1128抗体酶结合物：

a：取1.3mg的酶、1～4mg的10R-1128抗体，加入PBS缓冲液中，然后 再加入0.05ml戊二醛，室温下搅拌30分钟，避光反应4小时，然后再加入乙 醇胺至乙醇胺的浓度为0.1～0.3mol/L，室温下搅拌2小时，4℃下PBS透析过 夜，然后与等体积的甘油混合，再加入NaN₃至NaN₃的质量百分比浓度为 0.01％，即得10R-1128抗体酶结合物，于4℃条件下保存备用；

3)制备缓冲液：向浓度为0.01mol/L、pH＝8.5的Tris-HCl缓冲液中加入 BSA和NaN₃，混合均匀，即得所述的缓冲液；其中缓冲液中BSA的质量百 分比浓度为1％；NaN₃的质量百分比浓度为0.02％；

4)制备底物工作液：取600μl二乙醇胺、100μl浓度为1mol/L的NaOH 溶液、100μl浓度为1mol/L的MgCl₂溶液、100μl质量百分比浓度为10％的 NaN₃溶液，混匀，灭菌，制得底物缓冲液；取800μl底物缓冲液，然后向底 物缓冲液中加入200μl发光底物增强剂和50μl发光底物，混匀，灭菌，即 得底物工作液；

5)制备洗涤液：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入 吐温20和NaN₃，混合均匀，即得所述的洗涤液；其中洗涤液中吐温20的质 量百分比浓度为0.05％，NaN₃的质量百分比浓度为0.2％；

6)取发光底物、质控品、步骤1)制备的70R-17194抗体包被微孔板、 步骤2)制备的10R-1128抗体酶结合物、步骤3)制备的缓冲液、步骤4)制 备的底物工作液、步骤5)制备的洗涤液，组装，即得所述的化学发光免疫检 测脑型脂肪酸结合蛋白用试剂盒。