[发明专利]一种纳米氧化锌诱导的小鼠肝细胞凋亡动物模型的建立方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种动物模型的构建，特别涉及一种纳米氧化锌诱导的小鼠肝细胞凋亡动物模型的建立方法。

(二)背景技术

随着纳米技术的发展，纳米材料越来越多地进入到人们的生活，纳米颗粒由于其小尺寸效应、表面效应、量子尺寸效应和宏观量子隧道效应，使其广泛应用于医学及化工工业。但是，纳米颗粒有其特殊的生物活性，也使得其具有某些特殊的毒性。越来越多的研究在关注应用纳米材料的同时，也关注纳米颗粒对人类健康和环境的潜在的影响。

与普通锌相比，纳米氧化锌在电学、光学、国防、纺织和饲料工业等众多方面具有更优异的性能，现已广泛应用于环保材料、陶瓷材料、纺织、饲料添加剂等许多领域。纳米氧化锌具有强大的抗菌活性，在卫生、保健、医学等领域也得到了广泛应用例。随着产品的不断开发和应用，人们在日常生活和工作中接触到纳米氧化锌的机会越来越多，纳米锌粒子也因此获得了多种途径进入人体并与体内不同组织、细胞或生物分子相互作用的可能。特别是在医学、生物学领域，纳米氧化锌产品可直接应用于人体，与血液、体液或淋巴系统接触。与其他纳米材料相比，除了分散在空气中纳米氧化锌可经呼吸道或皮肤进入人体外，医用产品中的纳米氧化锌更易直接进入血液循环系统，并可能分布于全身其他脏器而产生毒副作用。纳米氧化锌之所以对细胞产生毒性，是因为纳米锌可以消弱线粒体功能，增加膜通透性，引起细胞凋亡。

然而，与纳米氧化锌的快速市场化形成鲜明对比的是，人们对于不同途径进入体内的纳米氧化锌可能产生的负面生物效应或毒副作用还知之甚少，对纳米氧化锌在体内的吸收、分布、代谢、排泄等体内行为也缺乏系统研究，这将对纳米氧化锌的进一步应用带来潜在影响。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种纳米氧化锌诱导的小鼠肝细胞凋亡动物模型的建立方法，为研究纳米氧化锌对生物体和环境造成的影响，阐明纳米材料在体内外的特殊性质，揭示纳米效应引起的毒性和生物活性，促进纳米锌材料在未来的生物应用中的研究提供参考，使其更安全、广泛地贡献人类社会。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种纳米氧化锌诱导的小鼠肝细胞凋亡动物模型的建立方法，所述方法为：将纳米氧化锌悬浮于缓冲液中制成纳米氧化锌悬液，然后将纳米氧化锌悬液经腹腔注射小鼠，连续注射30天，每天一次，成功构建纳米氧化锌诱导的小鼠肝细胞凋亡动物模型(通常在注射结束后第3天，脱臼处死小鼠，检测小鼠血清锌含量以及肝组织SOD活力、MDA、CAT、NO的含量；取肝组织，进行肝细胞凋亡的TUNEL法检测；利用RT-PCR对小鼠肝脏c-myc基因和p53基因表达进行检测，筛选肝细胞凋亡的模型为本发明所述的动物模型，通常凋亡率为60-80％)；所述纳米氧化锌悬液的注射量以纳米氧化锌质量计为50-150mg/kg。

进一步，所述纳米氧化锌粒径为47.8±5.7nm。

进一步，所述纳米氧化锌悬液浓度为10mg/mL。

进一步，所述缓冲液为pH7.0、10mM磷酸盐缓冲液。

进一步，所述小鼠为2-3月龄的ICR小鼠。

进一步，所述纳米氧化锌悬液的注射量以纳米氧化锌质量计为125mg/kg。

所述的TUNEL法检测肝细胞凋亡步骤如下：取部分肝组织制备石蜡切片，将石蜡切片常规脱蜡、水化，采用美国R&D公司过氧化物酶试剂盒，用荧光素标记，然后用结合了过氧化物酶的抗荧光素抗体与荧光素结合，再与底物DAB进行显色反应，在光学显微镜下阅片，拍照。所述的SOD的活力采用黄嘌呤氧化酶法进行测定，MDA的含量采用硫代巴比妥酸法进行测定，CAT的含量采用可见光法进行测定，NO的含量采用硝酸还原酶法测定，血液锌的含量用原子吸收分光光度法测定。

与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：本发明建立的动物模型具有制备简单、稳定可靠、可重复等特点，该模型对深入研究重金属中毒的发病机制的探讨以及药物的开发提供的新的途径和思路。

(四)附图说明

图1纳米氧化锌粒径扫描电镜图。

图2本发明所建模型的肝细胞凋亡的电镜观测图。

图3为TUNEL法检测肝细胞凋亡图。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例所采用的试剂和设备：