[发明专利]具有降氨能力的肝细胞培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种肝细胞培养基，尤其涉及一种具有降氨能力的肝 细胞培养基及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

细胞培养基既是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖 的基础物质，也是培养细胞生长和繁殖的生存环境。市售一般为化学 成分明确的试剂配制的合成培养基，主要可以分为两类，一类是液体 培养基；另一类是干粉培养基，目前常用于科研的培养基主要是无菌 液体培养基，RPMI1640液体培养基是其中的一种，其起初用于悬浮 培养和单层培养人白血病细胞，现适用于大量哺乳动物细胞，包括 HeLa、Jurkat、MCF-7、PC12、PBMC、星形胶质细胞和癌细胞等。 随着细胞培养技术的不断发展，对于细胞培养基的专业性要求越来越 高，因此，需要在基本培养基的基础上添加一些特定物质。

L-02细胞也是可以用RPMI1640液体培养基进行培养的一种永 生化肝细胞系，这种细胞系具有良好的肝功能和较强体外增殖能力， 并且没有致瘤性，是一种优异的人胎肝细胞源。同时L-02细胞可以 大量的产业化培养，用于细胞治疗技术研究和科研医疗中，具有很高 的应用价值。

但是L-02细胞在培养过程中会代谢产生大量氨，氨的存在会妨 碍细胞的生长，损害细胞功能，进一步会影响L-02细胞在科研和医 疗上的使用。因此，研制出一种能持续降氨的细胞培养基对目前L-02 细胞的培养以及使用来说是十分必要的。

发明内容

本发明目的在于克服L-02细胞在现有技术条件下培养容易产生 大量氨，影响细胞生长的不足，提供一种具有降氨能力的肝细胞培养 基及其应用，解决了L-02细胞在培养过程中产生大量氨的问题，得 到了能够持续降氨的细胞培养基，同时还能够增强L-02细胞的活力 与功能。

为实现上述目的，本发明所提供的具有降氨能力的肝细胞培养 基，该肝细胞培养基以RPMI1640培养基为基础培养基，含有10％ 胎牛血清，还含有肝细胞生长因子、L-鸟氨酸-α-酮戊二酸、胰岛素。

优选地，所述肝细胞培养基中肝细胞生长因子的含量为 10～20μg/L、L-鸟氨酸-α-酮戊二酸的含量为1～5mM、胰岛素的含量为 0.5～1.0U/L。

优选地，所述肝细胞培养基中还含有5～12g/L的谷氨酸盐，所述 谷氨酸盐为谷氨酸钠和/或谷氨酸钾。

优选地，所述肝细胞培养基中还含有0.5～1.0g/L的精氨酸。

进一步优选地，所述肝细胞培养基中肝细胞生长因子的含量为 13～16μg/L、L-鸟氨酸-α-酮戊二酸的含量为2～3mM、谷氨酸钠的含量 为7～12g/L、精氨酸的含量为0.53～0.75g/L。

进一步优选地，所述肝细胞培养基中肝细胞生长因子的含量为 17～19μg/L、L-鸟氨酸-α-酮戊二酸的含量为2～3.5mM、谷氨酸钾的含 量为5～8g/L、精氨酸的含量为0.75～0.85g/L。

进一步优选地，所述肝细胞培养基中肝细胞生长因子的含量为 15～18μg/L、L-鸟氨酸-α-酮戊二酸的含量为3.7～4.5mM、谷氨酸钠的 含量为8.3～10.2g/L、谷氨酸钾的含量为1.5～1.8g/L、精氨酸的含量为 0.8～0.9g/L。

更进一步优选地，所述肝细胞培养基还含有抗氧化剂，为还原型 谷胱甘肽和/或维生素C，其在培养基中的含量为10～50mg/L。

上述方案中，所述肝细胞为L-02细胞。

本发明还提供了一种利用上述肝细胞培养基培养肝细胞的方法， 每50ml所述肝细胞培养基接种的肝细胞数量小于或等于2.2×10⁷， 培养条件为5％CO₂，37℃，每24小时更换培养基，48小时后，细 胞铺满率为80～90％。