[发明专利]基于金纳米粒构建的比色生物传感器用于乳腺癌细胞中三磷酸腺苷的含量检测方法

权利要求书

1.一种基于金纳米粒构建的比色生物传感器用于乳腺癌细胞中三磷酸腺苷的含量检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

吸取AuNPs至离心管中，加入用PKS缓冲液稀释40-60倍ATP乳腺癌细胞提取液，孵化3-7min得到混合物，加入4-巯基苯硼酸至混合物中，再加入PKS缓冲液反应10-15min，观察颜色变化，采用紫外分光光度计，以A₅₂₀/A₆₈₃吸收比值与ATP浓度进行线性拟合，外标法绘制标准曲线，再进行样品浓度的测定；其中，PKS缓冲液离子强度范围为75-125mM，PKS缓冲体系pH范围为6.5-7.5。

2.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于AuNPs由柠檬酸还原法制备得到。

3.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于MPBA的浓度范围为3-7μM。

4.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于反应温度范围为0-25℃。

5.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于AuNPs的制备步骤如下：取25mM氯金酸5mL，加入120mL双蒸水，120℃搅拌加热至沸腾，然后快速倾入12.5mL柠檬酸钠，继续搅拌反应30min，得到的酒红色AuNPs，冷却至室温。

6.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于乳腺癌细胞为乳腺癌细胞T47D。

7.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于ATP乳腺癌细胞提取液的制备步骤如下：取3mL含细胞的培养液，在3000转/分钟的转速下离心7分钟，用磷酸盐缓冲溶液洗涤离心所得细胞，并将其重新分散于200μL的PKS缓冲溶液中，然后，将细胞放在0℃的冰水混合物中超声20min，然后再在4℃，18000rpm条件下超滤离心20min，取清液，并重新悬浮在200μL PKS缓冲液中得到ATP乳腺癌细胞提取液。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于使用Amicon Ultra-0.5超滤离心管进行离心。