[发明专利]一种用于夏冠一号节瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物SSR81及鉴定方法有效
| 申请号： | 201610056895.X | 申请日： | 2016-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN105543381B | 公开（公告）日： | 2019-09-20 |
| 发明（设计）人： | 何晓明;彭庆务;马金露;刘文睿;谢大森;江彪;罗少波;林毓娥;郭汉权;刘洪彪;王瑞;孙保娟;梁肇均 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院蔬菜研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司 44104 | 代理人： | 宣国华;刘艳丽 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 一号 杂交 种子 纯度 鉴定 ssr 引物 ssr81 方法 | ||
1.一种用于夏冠一号节瓜杂交种子纯度鉴定的SSR引物SSR81，其特征是：所述引物SSR81包括上游引物SSR81-F和下游引物SSR81-R，所述上游引物SSR81-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物SSR81-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种夏冠一号节瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是包括以下步骤：
(1)提取节瓜子叶的基因组DNA；
(2)以节瓜子叶的基因组DNA为模板，采用权利要求1中的引物SSR81进行PCR扩增；
(3)对PCR扩增产物进行凝胶电泳；
(4)对凝胶电泳结果进行分析，只有同时具有亲本特异性条带的单株才为真正的杂交种，缺少其中的任意一条带记为假杂种，其中引物SSR81能产生181bp的母本特异性标记SSR81181以及188bp的父本特异性标记SSR81188，根据凝胶电泳结果，计算种子纯度。
3.根据权利要求2所述的夏冠一号节瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤(2)中PCR扩增时，20μL的反应体系包括：1μL浓度为150ng·μL-1的节瓜子叶的基因组DNA，2μL含Mg2+的10×PCR buffer，1.5μL的浓度为2.5mM的dNTPs，1μL浓度为0.25mmol·L-1的上游引物SSR81-F，1μL浓度为0.25mmol·L-1的下游引物SSR81-R，1μL Taq酶，12.5μL ddH2O。
4.根据权利要求2所述的夏冠一号节瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤(2)中PCR扩增时的扩增程序为：95℃预变性3min后，94℃变性45s，68℃退火1min，72℃延伸1min，6个循环，其中退火温度每个循环降2℃；94℃变性30s，58℃退火1min，72℃延伸1min，8个循环，其中退火温度每个循环降1℃；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环后，72℃终延伸7min，4℃保存。
5.根据权利要求2所述的夏冠一号节瓜杂交种子纯度的鉴定方法，其特征是：步骤(3)中凝胶电泳采用质量百分含量为8％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
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