[发明专利]一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法

说明书

本发明公开了一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其是将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理后，加入考马斯亮蓝G‑250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度，最后用外标法定出该蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠的含量，所述外标法的外标物为氰基硼氢化钠。本发明操作步骤简单、快捷、成本低、毒性小。

技术领域

本发明涉及化学物质检测领域，具体涉及一种氰基硼氢化钠残留量的检测方法。

背景技术

氰基硼氢化钠是一种常用的络合型氢化物，具有优良的还原性，但同时也有一定的毒性。在医药行业，氰基硼氢化钠残留造成的安全问题早已引起人们的关注，而且药典中出现了三种氰化物残留的检测方法。不过，现有方法对氰化物残留的分析，要么只能做到定性分析，要么需要剧毒物质，如溴化氢，联苯胺等，如药典中的060氰化物检查法。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提出一种操作步骤简单、快捷、成本低、毒性小的蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法。

所采用的技术方案为：

一种蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠残留量的检测方法，其是将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理后，加入考马斯亮蓝G-250溶液和聚山梨酯20溶液的混合液中形成混合体系，采用紫外可见分光光度计测定该混合体系的吸光度，最后用外标法定出该蛋白样品或制品中氰基硼氢化钠的含量，所述外标法的外标物为氰基硼氢化钠。

优选地，所述外标法为校正曲线法。

优选地，所述校正曲线法包括氰基硼氢化钠标准梯度溶液和所述混合液的配制，然后取氰基硼氢化钠标准梯度溶液分别加入所述混合液中形成梯度标准体系，采用紫外可见分光光度计测定该梯度标准体系的吸光度，建立吸光度和浓度之间的标准曲线图。

优选地，所述混合液是考马斯亮蓝G-250溶液与体积浓度为10％的聚山梨酯20的混合液，两者配比的体积比为10:1。

优选地，所述混合体系的放置环境及时间为37℃避光水浴保存30min。

优选地，所述紫外可见分光光度计的检测波长为595纳米。

优选地，所述去除蛋白为将蛋白样品或制品进行煮沸。

优选地，所述将该蛋白样品或制品进行包括去除蛋白的预处理为：取蛋白原液，抽取到小烧杯中，调节pH于等电点附近；将调节好的样品分装于EP管中，再将EP管架于浮漂上放入沸水中，进行煮沸；沸水浴10-20min至明显絮状沉淀，10000rpm离心10min，取上清液为供试品溶液。

优选地，所述校正曲线法包括如下步骤：

S1.试液配制：

S11. 1mol/L氰基硼氢化钠标准溶液：精确称取0.0628g氰基硼氢化钠，用1mol/LNaOH溶液溶解并稀释到1.0ml，4℃保存；

S12.氰基硼氢化钠标准梯度溶液：取1mol/L氰基硼氢化钠标准溶液用纯化水分别稀释为0.25mmol/L,0.20mmol/L,0.15mmol/L,0.10mmol/L,0.05mmol/L,0.025mmol/L溶液；

S13.考马斯亮蓝G-250溶液：取考马斯亮蓝G-25010mg置于100ml量瓶中，加入5ml95％乙醇溶解，再加入10ml磷酸，用纯化水稀释到100ml，滤纸过滤，4℃保存；

S14. 10％聚山梨酯20溶液：量取1ml吐温-20置于10ml量瓶中，纯化水稀释到10ml，4℃保存；

S15.混合液：考马斯亮蓝溶液与10％吐温-20按10：1比例，混合；

S2.检测