[发明专利]一种毛细管电泳检测凝血酶与G-四链体结合速率的方法有效
| 申请号： | 201610058746.7 | 申请日： | 2016-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN105548322B | 公开（公告）日： | 2018-12-28 |
| 发明（设计）人： | 王建浩;顾亚琴;柳丽;丁淑敏;付敏丽;樊杰;程永江;邱琳;蒋鹏举 | 申请（专利权）人： | 常州大学 |
| 主分类号： | G01N27/447 | 分类号： | G01N27/447;G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 213164 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 毛细管 电泳 检测 凝血酶 四链体 结合 速率 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种毛细管电泳检测凝血酶与G‐四链体结合速率的方法，其特征在于：所述检测步骤如下：
(1)选取带有荧光染料的DNA序列FAM-F29；
(2)将步骤(1)所述的FAM-F29在浓度均为5mM的Na+、K+盐溶液下反应24小时，得到浓度为2μM的含有G‐四链体结构的DNA荧光探针溶液；
(3)将粉末状的凝血酶溶解于Tris-HCl缓冲溶液中，稀释成不同浓度的凝血酶溶液；
(4)将步骤(2)所述的G-四链体结构的DNA荧光探针溶液与等体积的步骤(3)所述的凝血酶溶液在37℃恒温水浴下混合，得到凝血酶与G-四链体结构的DNA荧光探针复合物；其中，凝血酶与G‐四链体结构的DNA荧光探针的摩尔比为10:1；
(5)荧光毛细管电泳检测：将步骤(4)所述的复合物用荧光毛细管电泳检测，测定混合物通过检测通道峰面积与总的DNA通过检测通道的峰值面积之比，进行线性拟合，绘制峰面积比—时间的标准曲线，对照标准曲线计算凝血酶与G-四链体结合的速率。
2.如权利要求1所述的一种毛细管电泳检测凝血酶与G‐四链体结合速率的方法，其特征在于：步骤(1)所述的荧光染料为6-FAM或5-FAM。
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