[发明专利]一种抗菌的诸葛菜人工种子制作方法

说明书

本发明公开了一种抗菌的诸葛菜人工种子制作方法，属于生物技术和农业工程领域，本发明所述的方法包括诸葛菜的芽诱导、芽繁培养、芽的包埋和人工种子胶囊制备，所述芽的包埋和人工种子胶囊制备的过程中的包埋液是含纳米二氧化钛的质量浓度为7％海藻酸钠水溶胶。根据本发明制作方法制作出来的人工种子，在有菌环境下生根发芽率高，污染率低，相比于添加传统杀菌剂的人工种子具有抗菌效果更好，萌发率更高，对外植体毒害作用更低的特点，进一步将诸葛菜人工种子技术推向生产应用。

技术领域

本发明属于生物技术和农业工程领域，具体涉及一种抗菌的诸葛菜人工种子的制作方法。

背景技术

诸葛菜属于十字花科一、二年生草本植物，广泛分布于我国东北、华北，适应性强，耐寒、耐旱、耐阴，病虫害少。花呈紫色或白色，生活史从每年9月至次年6月，甚至在寒冷冬季仍可保绿不枯，可以较好地覆盖地面，是北方地区不可多得的早春观花，冬季观绿的地被植物，因此深受人们喜欢。诸葛菜种子的脂肪酸组成中，芥酸、亚麻酸含量低，棕榈酸、油酸和亚油酸的含量为总脂肪的89.8％，即诸葛菜为高亚油酸低芥酸种质，其种子油是品质优良的食用油，尤其适合心血管病患者食用。近年来诸葛菜在组织培养、体细胞杂交等方面的研究多有进展，诸葛菜人工种子技术也颇有进展，现在已经建立了一套较为完整的诸葛菜人工种子制作方法，但距离实际应用还有一定距离。

人工种子技术的实质就是将组织培养产生的外植体，如芽或胚状体，包埋在人工制作的含有特定激素和营养的胶囊中，具有天然种子长成植株的功能。与天然种子不同，人工种子不受季节的影响，可以根据播种环境改变激素和营养物质配方，而且成本低廉，可控性强，研制成功必然会带来一场农业革命。

防腐抗菌问题一直是阻碍人工种子技术大规模推广的一大难题，常用杀菌剂如多菌灵、青霉素、先锋霉素等均对植物有一定负面影响，并且单独添加往往只能抵抗几种菌类污染。目前诸葛菜人工种子只能在无菌条件下萌发，并未有人进行过诸葛菜人工种皮抗菌性研究，因此抗菌能力的研究已经成为推广诸葛菜人工种子技术发展亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗菌的诸葛菜人工种子制作方法，制作出来的诸葛菜人工种子种皮具有较高的抗菌能力、种子可以在有菌环境中顺利萌发，为诸葛菜人工种子技术进一步走向实际应用提供技术支持。

本发明采用具体技术方案为：

一种抗菌的诸葛菜人工种子的制作，包括步骤：

步骤1，诸葛菜的芽诱导：取诸葛菜幼苗,无菌水冲洗，切取腋芽和顶芽，消毒后进行芽诱导培养；

步骤2，诸葛菜的芽繁培养：取步骤1芽诱导培养的诸葛菜组培苗，切取幼芽，转接到芽繁培养基上进行芽繁培养；

步骤3，诸葛菜芽的包埋和人工种子胶囊制备：取步骤2中在芽繁培养基上生长的幼芽，切取若干个一定长度的芽并逐个放在包埋液表面，所述包埋液是含纳米二氧化钛的质量浓度为7％海藻酸钠水溶胶；用玻璃吸管先吸取少量包埋液，再吸入一个诸葛菜芽，然后滴入质量浓度为2％的CaCl₂溶液中，络合反应形成固态人工种子，取出所述固态人工种子，于无菌水中清洗并吸干表面水分即可。

进一步，所述步骤1中的芽诱导培养使用的培养基的成分包括：MS培养基、2mg/L6-BA、0.2mg/L NAA、3％蔗糖、0.65％琼脂；芽诱导过程的光照强度为2000～3000Lux日光灯照射12小时。

进一步，所述步骤2中的芽繁培养基的成分包括：MS培养基、2.5mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA、3％蔗糖、0.65％琼脂；芽繁培养的光照强度为2000～3000Lux日光灯照射12小时。

进一步，所述步骤3中在芽繁培养基上生长的幼芽生长时间为30天；切取若干个芽的长度为8mm。