[发明专利]一种测定蛋白激酶活性的方法和蛋白激酶抑制剂活性的方法

权利要求书

1.一种测定蛋白激酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）处理金电极：准备多根金电极并清理干净金电极表面，然后在金电极表面滴加氧化石墨烯溶液，烘干备用；

（2）测定蛋白激酶的活性：选取一组不同浓度的蛋白激酶和同一浓度的ATP进行水浴反应，得到一组蛋白激酶反应液，再分别将得到的蛋白激酶反应液和Na₂MoO₄溶液滴加在步骤（1）处理后的金电极表面，静置后烘干，然后分别对金电极进行方波伏安曲线测试，根据伏安曲线得到峰电流，将得到的峰电流与每根金电极对应的蛋白激酶的浓度做标准曲线；

（3）根据所述标准曲线计算不同浓度下蛋白激酶的活性；

其中，所述步骤（2）中，所述ATP浓度为50～500μM，Na₂MoO₄溶液的合适浓度范围为6～10mM；水浴反应的温度35.5～38.5℃，水浴反应的时间为1～2小时，静置的时间为10～30min。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，ATP浓度的选取需进行优化，其优化过程具体为：选取一组不同浓度的ATP分别和同一浓度的蛋白激酶进行水浴反应，得到一组蛋白激酶反应液，再分别将得到的一组蛋白激酶反应液和Na₂MoO₄溶液滴加在步骤（1）处理后的金电极表面，静置后烘干，然后分别对金电极进行方波伏安曲线测试，根据伏安曲线分别得到峰电流，选取电信号增加最大时对应的ATP浓度即为最优的ATP浓度。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，方波伏安曲线测试的条件为：电解液为0.5M的H₂SO₄，电压扫描范围为0.1～0.5V，频率为15HZ。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，金电极的表面清理过程具体为：将金电极在含Al₂O₃的抛光布上进行抛光，抛光后的金电极用二次水冲洗，再用无水乙醇和二次水分别超声清洗，用氮气吹干。

5.一种测定蛋白激酶抑制剂活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）处理金电极：准备多根金电极并清理干净金电极表面，然后在金电极表面滴加氧化石墨烯溶液，烘干备用；

（2）测定蛋白激酶抑制剂的活性：选用一组不同浓度的蛋白激酶抑制剂分别和同一浓度的蛋白激酶、同一浓度的ATP进行水浴反应，再分别将得到的反应液与Na₂MoO₄溶液滴加在步骤（1）处理后的金电极表面，静置后烘干，然后分别对金电极进行扫方波伏安曲线测试，根据伏安曲线分别得到峰电流，将得到的峰电流与每根金电极对应的蛋白激酶抑制剂的浓度做拟合曲线；

（3）根据所述拟合曲线计算不同浓度下蛋白激酶抑制剂对蛋白激酶活性的抑制程度；

其中，所述步骤（2）中，所述ATP浓度为50～500μM，Na₂MoO₄溶液的合适浓度范围为6～10mM；水浴反应的温度35.5～38.5℃，水浴反应的时间为1～2小时，静置的时间为10～30min。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，ATP浓度的选取需进行优化，其优化过程具体为：选取一组不同浓度的ATP分别和同一浓度的蛋白激酶进行水浴反应，得到一组蛋白激酶反应液，再分别将得到的一组蛋白激酶反应液和Na₂MoO₄溶液滴加在步骤（1）处理后的金电极表面，静置后烘干，然后分别对金电极进行方波伏安曲线测试，根据伏安曲线分别得到峰电流，选取电信号增加最大时对应的ATP浓度即为最优的ATP浓度。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，方波伏安曲线测试的条件为：电解液为0.5M的H₂SO₄，电压为0.1～0.5V，频率为15HZ。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，金电极的表面清理过程具体为：将金电极在含Al₂O₃的抛光布上进行抛光，抛光后的金电极用二次水冲洗，再用无水乙醇和二次水分别超声清洗，用氮气吹干。