[发明专利]一种深绿木霉菌株及其应用

权利要求书

1.深绿木霉菌株用于降解烟草纤维素和果胶的方法，其特征在于，所述菌株为深绿木霉C9-13，于2013年08月27日保藏在北京的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8077，所述方法包括以下步骤：

步骤1)将深绿木霉C9-13菌株划线接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，28℃培养48～72h，再加入无菌水振荡得到孢子悬液；

步骤2)将孢子悬液以5～30％的接种量接种于发酵培养基中，在恒温摇床上培养48～72h，摇床转速为100～200r/min，温度为25～28℃；再将发酵培养基于3000～6000r/min、4～10℃下离心5～10min，即得到发酵上清液；

步骤3)将5～30重量份的发酵上清液均匀喷施于100重量份的烟草表面，再将烟草用塑料袋密封，放于烘箱中，在50℃条件下处理6h。

2.如权利要求1所述的深绿木霉菌株用于降解烟草纤维素和果胶的方法，其特征在于，所述步骤2)中，将孢子悬液以10％的接种量转接入发酵培养基中，在恒温摇床上培养72h，摇床转速为170r/min，温度为25℃；再将发酵培养基于6000r/min、4℃下离心5min。

3.如权利要求1所述的深绿木霉菌株用于降解烟草纤维素和果胶的方法，其特征在于，所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备方法为：称取200g的马铃薯洗净去皮，并切成小块，加水煮烂，用八层纱布过滤，加热，加入琼脂15-20g，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖20g，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎，120℃下灭菌20分钟后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。

4.如权利要求1所述的深绿木霉菌株用于降解烟草纤维素和果胶的方法，其特征在于，所述步骤2)中，发酵培养基为每升水中包含小麦秸秆粉末5～30g、硫酸铵0.5～2.0g、尿素0.1～0.5g、蛋白胨0.5～2.0g、七水合硫酸镁0.1～0.5g和氯化钙0.1～0.3g。

5.如权利要求4所述的深绿木霉菌株用于降解烟草纤维素和果胶的方法，其特征在于，所述步骤2)中，所述发酵培养基为每升水中包含小麦秸秆粉末10g、硫酸铵1g、尿素0.2g、蛋白胨1g、七水合硫酸镁0.1g和氯化钙0.1g。

6.如权利要求1所述的深绿木霉菌株用于降解烟草纤维素和果胶的方法，其特征在于，所述步骤2)中，将孢子悬液以10％的接种量转接入发酵培养基中，在恒温摇床上培养72h，摇床转速为170r/min，温度为25℃；再将发酵培养基于6000r/min、4℃下离心5min；所述发酵培养基为每升水中包含小麦秸秆粉末10g、硫酸铵1g、尿素0.2g、蛋白胨1g、七水合硫酸镁0.1g和氯化钙0.1g；所述马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备方法为：称取200g的马铃薯洗净去皮，并切成小块，加水煮烂，用八层纱布过滤，加热，加入琼脂15-20g，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖20g，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎，120℃下灭菌20分钟后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。